国家食品药品监督管理局关于印发化妆品中丙烯酰胺等禁用物质或限用物质检测方法的通知
各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局（药品监督管理局）：
为规范化妆品中禁用物质和限用物质检测技术要求，提高化妆品卫生质量安全，化妆品中丙烯酰胺等禁用物质或限用物质的检测方法已经国家食品药品监督管理局化妆品标准专家委员会审议通过，现予印发。
附件：1．化妆品中丙烯酰胺的检测方法
2．化妆品中甲醛的检测方法
3．化妆品中挥发性有机溶剂的检测方法
4．化妆品中钕等15种稀土元素的检测方法
5．化妆品中邻苯二甲酸酯类物质的检测方法
6．化妆品中三氯卡班的检测方法
7．化妆品中苯氧异丙醇的检测方法
8．化妆品中奎宁的检测方法
9．化妆品中6-甲基香豆素的检测方法
10．化妆品中苯甲醇的检测方法
11．化妆品中苯甲酸及其盐的检测方法
国家食品药品监督管理局
二○一一年二月二十一日
附件1：
化妆品中丙烯酰胺的检测方法
1 范围
本方法规定了采用液相色谱-串联质谱法测定化妆品中丙烯酰胺单体（cas：79-06-1）的方法。
本方法适用于化妆品中丙烯酰胺单体含量的测定。
2 方法提要
样品经过提取后，用液相色谱-串联质谱法测定，以多反应离子监测模式进行监测，采用特征离子丰度比进行定性，丙烯酰胺与内标峰面积比定量。本方法对丙烯酰胺的检出限为0.00005 µg，定量下限为0.0002 µg；若取0.2 g样品测定，本方法对丙烯酰胺的检出浓度为0.005 mg/kg，最低定量浓度为0.025 mg/kg。
3 试剂
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。
3.1 丙烯酰胺，纯度 ≥ 99.0 %。
3.2 氘代丙烯酰胺（2，3，3-d3），纯度 ≥ 98 %。
3.3 醋酸铵。
3.4 乙腈，色谱纯。
3.5 甲醇，色谱纯。
3.6 空白化妆品样品：选择不含丙烯酰胺的化妆品作为空白样品。
3.7 乙腈溶液[φ（乙腈）= 10%]：量取10 ml乙腈（3.4）置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
3.8 醋酸铵溶液[c（醋酸铵）= 0.02 mol/l]：称取醋酸铵0.08 g，置50 ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，即得浓度约为0.02 mol/l的醋酸铵溶液。
3.9 丙烯酰胺标准储备溶液[r（丙烯酰胺）= 0.5 g/l]： 称取丙烯酰胺标准品（3.1）50 mg（精确到0.1 mg）置100 ml量瓶中，加乙腈溶液（3.7）使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.5 g/l的丙烯酰胺标准储备溶液。
3.10丙烯酰胺系列标准溶液：按照表1操作，分别精密量取一定体积的丙烯酰胺标准储备溶液（3.9）置10 ml量瓶中，以乙腈溶液（3.7）稀释并定容至刻度，得不同浓度的丙烯酰胺系列标准溶液。
3.11内标工作溶液：称取氘代丙烯酰胺标准品10 mg（精确到0.1 mg）置100 ml量瓶中，加乙腈溶液（3.7）使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为100 μg/ml的氘代丙烯酰胺储备溶液，然后精密量取氘代丙烯酰胺储备溶液1ml置50 ml量瓶中，加乙腈溶液（3.7）使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为2 μg/ml的氘代丙烯酰胺内标工作溶液。
3.12 丙烯酰胺加入空白样品标准溶液：取空白化妆品样品6份，每份约0.20 g（精确至0.001 g）于5 ml塑料离心管中，分别加浓度为2 μg/ml的内标溶液50 μl，涡旋30 s，再分别加丙烯酰胺系列标准溶液50 μl，涡旋30 s；然后加0.15 ml 0.02 mol/l的醋酸铵水溶液，涡旋30 s。再加2.0 ml乙腈，涡旋60 s后，以10000 rpm离心转速10 min，取上清液，氮气吹干，残渣加2 ml色谱流动相复溶，涡旋60 s，以10000 rpm转速离心5 min，取上清液， 经0.45 μm微孔滤膜过滤后，滤液作为待测液，备用，使得每克样品中含有丙烯酰胺0.025 μg、0.05 μg、0.25 μg、 1.25 μg、12. 5 μg、25 μg。
4 仪器
4.1 液相色谱-三重串联四极杆质谱联用仪。
4.2 分析天平：感量0.0001 g。
4.3 超声波清洗仪。
4.4 高速离心机。
4.5 精密移液器。
4.6 涡旋振荡器。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
称取样品0.20 g （精确至0.001 g），置5 ml塑料离心管中，加浓度为2 μg/ml的内标溶液50 μl， 涡旋30 s；然后加0.15 ml 0.02 mol/l的醋酸铵水溶液，涡旋30 s，再加2.0 ml乙腈，涡旋60 s后，以10000 rpm转速离心10 min，取上清液，氮气吹干，残渣加2 ml色谱流动相复溶，涡旋60 s，以10000 rpm转速离心5 min，经0.45 μm微孔滤膜过滤后，滤液作为待测液，备用。
5.2 液相色谱-三重串联四极杆质谱联用分析条件
5.2.1 色谱参考条件
色谱柱：waters atlantis t3（3.5 μm， 2.1 × 100 mm）或具有同等柱效的色谱柱；
流动相：甲醇＋0.1%甲酸水溶液 = 1.5＋98.5，恒度洗脱3 min；
流速：0.3 ml/min；
柱温：25 ℃；
进样量：5 μl。
5.2.2 质谱参考条件
离子源： 电喷雾离子源（esi源）；
监测模式： 正离子监测模式； 监测离子对及相关电压参数设定见表2；
雾化气压力： 50 psi；
干燥气流速： 12 l/min；
干燥气温度： 350 ℃；
毛细管电压： 4000 v；
0 - 1 min：不进入质谱仪分析， 1 - 2.5 min：进入质谱仪分析。
5.3 定性判定
用液相色谱-串联质谱法对样品进行定性判定，如果检出的色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且所选择的监测离子对的相对丰度比与标准样品的离子对相对丰度比相一致（见表3），则可以判断样品中存在丙烯酰胺。
5.4 定量测定
在“5.2”项液相色谱-三重四极杆质谱联用分析条件下，用丙烯酰胺加入空白样品的系列浓度的标准溶液（3.12）分别进样，以丙烯酰胺加入空白样品的系列浓度为横坐标，丙烯酰胺与内标的峰面积比为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，其线性相关系数应 > 0.99。取“5.1”项下处理得到的样品待测溶液进样5 μl，将丙烯酰胺与内标的峰面积比代入标准曲线，计算丙烯酰胺的质量浓度，按“6 计算”，计算样品中丙烯酰胺的含量。
5.5 平行实验
按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。
6 计算（略）
7 回收率和精密度
两个浓度水平的平均提取回收率在85 - 110%，并且rsd小于8％（n=6），平均方法回收率在96.6 - 106％之间，并且rsd小于8％（n=6）。
表1 丙烯酰胺系列标准溶液的配制
表2 三重四级杆离子对及相关电压参数设定表
表3 监测离子和离子相对丰度比
8 色谱图（略）
附件2：
化妆品中甲醛的检测方法
1 范围
本方法规定了采用柱前衍生化液相色谱-紫外检测法测定化妆品中甲醛（cas ：50-00-0）的方法。
本方法适用于化妆品中甲醛含量的测定。
2 方法提要
甲醛测定采用柱前衍生化法，甲醛与2，4-二硝基苯肼反应生成黄色的2，4-二硝基苯腙（见图1），经高效液相色谱分离，紫外检测器在355 nm波长下检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对甲醛的检出限为0.01 µg，定量下限为0.052 µg。取0.2 g样品时，本方法对甲醛的检出浓度为0.001%，最低定量浓度为0.0052%。
图1 甲醛衍生化反应式（略）
3 试剂
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。
3.1 甲醛标准物质水溶液。
3.2 2，4-二硝基苯肼，纯度 ≥ 99.0%。
3.3 三氯甲烷，色谱纯，含量 ≥ 99.9%。
3.4 盐酸（r20 =1.19 g/ml）。
3.5 氢氧化钠。
3.6 磷酸氢二钠（na2hpo4?12h2o）。
3.7 磷酸二氢钠（nah2po4?2h2o）。
3.8 乙腈，色谱纯。
3.9 甲醇，色谱纯。
3.10 去离子水。
3.11 2，4-二硝基苯肼盐酸溶液：称取2，4-二硝基苯肼（3.2） 0.20 g，置于锥形瓶中，先加浓盐酸（3.4）40 ml使溶解，必要时可超声助溶，再加去离子水（3.10）60 ml，摇匀，即得。
3.12 氢氧化钠溶液[c（naoh）= 1 mol/l]：称取naoh（3.5）10 g，加水适量溶解后，转移到250 ml量瓶中，用去离子水（3.10）稀释并定容至刻度，摇匀，即得。
3.13 磷酸缓冲溶液[c（po43-）0.5 mol/l]：精密称定nah2po4?2h2o（3.7）2.28 g和na2hpo4?12h2o（3.6）12.67 g，加水适量溶解后，转移到100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
3.14 乙腈水溶液（9＋1）：量取乙腈（3.8）180 ml，置锥形瓶中，加水20 ml，摇匀，即得。
3.15甲醛系列标准溶液：精密量取适量甲醛标准物质水溶液（3.1）置于10 ml量瓶中，加乙腈水溶液（3.14）稀释至刻度，摇匀，得质量浓度约为1.04 mg/ml的甲醛储备液，然后按照表1进行标准溶液的配制。
表1 甲醛系列标准溶液配制1）
注1）：甲醛储备溶液的初始浓度应以甲醛准物质水溶液的标示量计算。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪：具有紫外检测器。
4.2 分析天平：感量0.001 g。
4.3 超声波清洗仪。
4.4 离心机。
4.5 精密吸量管或精密移液器。
4.6 涡旋振荡器。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
称取化妆品样品0.20 g（精确至0.001 g），置具塞刻度管中，加乙腈水溶液（3.14）至2 ml，涡旋2 min，使混匀，以5000 rpm转速离心5 min，精密量取上清液1 ml置5 ml 离心管中，加水2 ml，涡旋30 s，必要时以5000 rpm转速离心5 min，精密量取上清液1 ml置10 ml离心管中，加2，4-二硝基苯肼盐酸溶液（3.11）0.4 ml，涡旋1 min，静置2 min，加磷酸缓冲液（3.13）0.4 ml，再加氢氧化钠溶液（3.12）约1.9 ml调至中性，涡旋10 s，然后加入4 ml 三氯甲烷（3.3），涡旋3 min，以5000 rpm转速离心10 min，取三氯甲烷层溶液1 ml置离心管中，以5000 rpm转速离心10 min，取三氯甲烷层溶液，作为色谱分析待测液，备用。
5.2 色谱参考条件
色谱柱：c18色谱柱（250 × 4.6 mm，5 μm）；
流动相：甲醇＋水（60＋40）；
流速：1.0 ml/min；
柱温：25 ℃；
检测波长：355 nm；
进样体积：10 µl；
运行时间：25 min。
5.3 甲醛标准曲线待测溶液的制备
精密量取5.2 μg/ml、10.4 μg/ml、52 μg/ml、104 μg/ml、208 μg/ml、260 μg/ml系列标准工作溶液各1 ml置5 ml 离心管中，加水2 ml，涡旋30 s，必要时以5000 rpm转速离心5 min，然后精密量取上清液1 ml置10 ml离心管中，加2，4-二硝基苯肼盐酸溶液（3.11）0.4 ml，涡旋1 min，静置2 min，加磷酸缓冲液（3.13）0.4 ml，再加氢氧化钠溶液（3.12）约1.9 ml调至中性，涡旋10 s，然后精密加入4 ml 三氯甲烷（3.3），涡旋3 min，以5000 rpm转速离心10 min，取三氯甲烷层溶液1 ml置离心管中，以5000 rpm转速离心10 min，取三氯甲烷层，作为色谱分析待测液，备用。
5.4 测定
在“5.2”项色谱条件下，取“5.3”项下处理得到的标准曲线待测溶液分别进样，进行液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，甲醛衍生物2，4-二硝基苯腙的峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下处理得到的待测溶液进样10 μl，根据测定的甲醛衍生物2，4-二硝基苯腙的峰面积，代入标准曲线计算游离甲醛的质量浓度。按“7计算”，计算样品中游离甲醛的含量。
6 平行实验
按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
7 计算（略）
8 回收率和精密度
多家实验室验证的平均回收率为99.9% - 104%，相对标准偏差小于7%（n=6）。
9 色谱图（略）
附件3：
化妆品中挥发性有机溶剂的检验方法
1 范围
本方法规定了测定化妆品中15种挥发性有机溶剂的顶空-气相色谱法。
本方法适用于发胶、啫哩水、摩丝、爽肤水、祛痘水、精华露、洗发水、沐浴露、祛斑霜及指甲油等不同基质的化妆品中15种挥发性有机溶剂的含量测定。
本方法所指的15种挥发性有机溶剂为二氯甲烷、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烯、三氯甲烷、1，2-二氯乙烷、苯、三氯乙烯、甲苯、四氯乙烯、乙苯、间、对-二甲苯、苯乙烯、邻-二甲苯和异丙苯。
本方法的检出限和定量下限以3倍空白噪音和10倍空白噪音相对应的量或浓度表示。本方法中各种挥发性有机溶剂的检出限、定量下限及取1g样品时的检出浓度、最低定量浓度见表1。
表1 15种挥发性有机溶剂的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度
2 原理
样品用水稀释，经顶空处理达到气-液平衡后进样，用具有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分析，以保留时间定性，峰面积外标法定量。
3 试剂
3.1 甲醇，色谱纯。
3.2 氯化钠，分析纯：550℃烘2h～3h。
3.2 15种挥发性有机溶剂标准品：二氯甲烷、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烯、三氯甲烷、1，2-二氯乙烷、苯、三氯乙烯、甲苯、四氯乙烯、乙苯、间、对-二甲苯、苯乙烯、邻-二甲苯、异丙苯（均为色谱纯）。
3.4 15种挥发性有机溶剂标准溶液：分别称取15种挥发性有机溶剂标准品各10mg（精确至0.1mg），分别置于已加少量甲醇的10ml容量瓶中，待溶解完全后用甲醇定容。配成如表2所示浓度的标准储备溶液单标，再取各标准储备溶液单标适量，用水稀释配成混合标准使用溶液和标准系列。
表2 15种挥发性有机溶剂的标准储备溶液浓度及标准系列浓度
4 仪器
4.1 气相色谱仪，具氢火焰离子化检测器，分流/不分流进样口，配色谱工作站。
4.2 自动顶空装置，或超级恒温水浴锅（控温精度 0.5℃）和气密针。
4.3 顶空瓶：20ml，配聚四氟乙烯密封盖，带刻度。使用前于120℃烘烤2h～3h。4.4 十万分之一电子天平。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
对于易溶于水的样品，称取样品约1.0g（精确至1mg）于100ml具塞刻度管中，加水至刻度，混匀，此溶液作为待测样液备用；对于难溶于水的样品，直接称取样品约0.1g（精确至1mg）于已加1.0g氯化钠的顶空瓶中，加水至10ml后立即盖上瓶盖轻轻摇匀，作为待测样液。
5.2 测定
5.2.1 色谱及顶空参考条件
色谱柱：db-1，30m×0.32mm i.d.，0.25mm；或选用同等极性的弹性石英毛细管柱。
氮气流速：45.0ml/min；氢气流速：40.0ml/min；空气流速：450ml/min。分流比：10：1。
柱流量：1.0ml/min。
检测器：氢火焰离子化检测器。
温度：进样口温度180℃；检测器温度200℃；柱温35℃（5min），5℃ /min升至120℃，再以30℃ /min升至220℃（5min）。
顶空条件：水浴温度：60℃；平衡时间：30min；进样体积：60μl。
5.2.2 校准曲线的制备
在设定色谱条件下，分别准确吸取挥发性有机溶剂标准系列溶液（3.3）10.0ml于已加1.0g氯化钠的顶空瓶内，立即盖上瓶盖轻轻摇匀，置于60℃水浴平衡30min。取气液平衡后的液上气体60μl注入气相色谱仪进行分析。根据标准系列质量浓度和峰面积，绘制校准曲线。
5.2.3 样品测定
在设定色谱条件下，取待测样液10.0ml于已加1.0g氯化钠的顶空瓶内，立即盖上瓶盖轻轻摇匀，置于60℃水浴中平衡30min。用气密针取待测样品溶液气液平衡后的液上气体60μl注入气相色谱仪，进行分析。色谱图检出的物质，经与该物质的标准质谱图比较确证后，根据峰面积，从校准曲线上查得相应组分的质量浓度。
5.3 空白试验
除不称取样品外，按以上步骤进行。
5.4 平行试验
按以上步骤，做两份样品的平行测定。
6 结果计算
r ´ v
w（挥发性有机溶剂）=----------------------
m
式中：w（挥发性有机溶剂）-- 样品中挥发性有机溶剂的质量分数，mg/g；
r -- 从校准曲线上查得的测试溶液中挥发性有机溶剂的质量浓度，mg/l；
v -- 样品定容体积，ml；
m -- 样品取样量，g。
7 色谱图（略）
8 阳性结果的确认
对于测定过程中有阳性结果的样品，建议用气相色谱-质谱法确认。
8.1 气相色谱-质谱参考条件
色谱柱：db-1，30m×0.32mm i.d.，0.25mm；或选用同等极性的弹性石英毛细管柱。
柱温：初始温度35℃，保留5min，然后以5℃ /min的速度升至120℃，再以30℃/min的速度升至220℃，保留5min；
进样口温度180℃，离子源温度230℃，接口温度230℃，分流比：10：1，柱流量：1.5ml/min，恒流模式，选择离子检测。
8.2 质谱参考特征离子
表3 15种挥发性有机溶剂的质谱参考特征离子
9 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的10%。
附件4：
化妆品中钕等15种稀土元素的检测方法
1 范围
本标准规定了测定化妆品中钕 （nd）、镧（la）、铈（ce）、镨 （pr ）、镝（dy ）、铒 （er）、铕 （eu ）、钆 （gd ）、钬 （ho ）、镥 （lu ）、钐（sm ）、铽（tb）、铥（tm ）、钇（y）、镱（yb）15种稀土元素的电感耦合等离子体质谱法。
本方法适用于化妆品中钕等稀土元素的测定。
2 原理
样品微波消解处理成溶液后，经气动雾化器以气溶胶的形式进入氩气为基质的高温射频等离子体中，经过蒸发、解离、原子化、电离等过程，转化为带正电荷的正离子，经离子采集系统进入质谱仪，质谱仪根据质荷比进行分离，质谱积分面积与进入质谱仪中的离子数成正比。即被测元素浓度与各元素产生的信号强度cps成正比，与标准系列比较定量。
若取0.5g样品，本方法定量下限（mg/l）和最低定量浓度（mg/kg）分别为： la ，0.05、2.5；ce，0.05、2.5；pr，0.04、2.0；nd，0.09、4.5；sm，0.07、3.5；eu，0.03、1.5；gd，0.13、6.5；tb，0.14、7.0；dy，0.05、2.5；ho，0.07、3.5；er， 0.07、3.5；tm，0.04、2.0；yb，0.07、3.5；lu，0.08、4.0；y，0.10、5.0。
3 试剂
3.1 超纯水：18.2mωcm。
3.2 硝酸（5＋95）：量取优级纯硝酸（ρ20=1.42g/ml）5 ml，加入95 ml超纯水（3.1）中。
3.3 过氧化氢：[w（h2o2）= 30%]。
3.4 混合标准储备液： la、ce、pr 、nd、dy、er、eu 、gd 、ho 、lu 、sm 、tb、tm 、y、yb [ρ=10.0mg/l]。选用相应浓度的持证混合标准溶液。
3.5混合标准使用液： 准确移取混合标准储备液[ρ=10.0mg/l]10 ml，用硝酸（5＋95）（3.2）定容至100 ml，摇匀，配成质量浓度为1000µg/l的混合标准使用液。
3.6内标储备溶液： re [ρ=10.0mg/l]、rh [ρ=10.0mg/l]。选用相应浓度的持证混合标准溶液。
3.7内标使用液： 用硝酸（5＋95）（3.2）配成浓度为1 mg/l的（re＋rh）混合内标使用溶液。[注1]
3.8质谱调谐液： 锂（li）、钇（y）、铈（ce）、铊（tl）、钴（co）混合溶液为质谱调谐液，浓度为10μg/l。[注2]
4 仪器：
4.1 电感耦合等离子体质谱（icp-ms），微机工作站。
4.2 微波消解仪，高压微波消解罐。
4.3 水浴锅（或敞开式电加热恒温炉）。
4.4 天平：感量0.001g。
5 分析步骤
5. 1 样品预处理：
准确称取样品约0.5g（粉状样品可称取0.3g左右），精确至0.01g，置于清洗好的聚四氟乙烯微波内罐中。含乙醇等挥发性原料的样品如香水、摩丝、沐浴液、染发剂、精华素、刮胡水、面膜等，则先放入温度可调的100ºc水浴锅或电加热恒温炉上挥发（不得蒸干）。油脂类和膏粉类等干性物质，如唇膏、睫毛膏、眉笔、胭脂、唇线笔、粉饼、眼影、爽身粉、痱子粉等，取样后先加水0.5ml～1.0ml，润湿。上述有些样品必要时加硝酸预消化。
加入浓硝酸6ml，30%过氧化氢2ml，在最佳条件下进行微波消解。冷却至室温，将消解好的含样品的微波内罐放入温度可调的100ºc水浴锅或电加热恒温炉加热数分钟（不得蒸干），驱除样品中多余的氮氧化物，以免干扰测定。用超纯水定容至25ml容量瓶中，于聚乙烯管中保存，待测。对于某些粉质化妆品消解后存在一些沉淀物或悬浊物，定容后过滤，待测。图1为微波消解参考条件。[注3]
图1 微波消解程序升温条件（略）
5.2 测定
5.2.1仪器参考条件
用调协液调整仪器各项指标，使仪器灵敏度、氧化物、双电荷、分辨率等指标达到要求。仪器参考条件：射频功率：1300w；载气流速：1.14l/min；采样深度：6.8mm；雾化器：barbinton；雾化室温度：2℃；采样锥与截取锥类型：镍锥；冷却水流速：1.70 l/min。[注4]
5.2.2校准曲线的制备
分别准确移取混合标准使用液（3.5）0.00ml、0.05ml、0.10ml、0.50ml、1.00ml、2.00ml、5.00ml、10.0ml于100ml容量瓶中，加硝酸（5＋95）溶液（3.2）至刻度，摇匀。此时溶液中稀土元素浓度分别为0.00、0.50、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100μg /l。根据待测元素的实际含量，可在0.50μg /l～100μg /l范围内选取合适的校准曲线范围。
5.2.3样品测定
在仪器最佳条件下，引入在线内标溶液（3.7），标准和样品同时进行icp-ms分析。每一样品定量需三次积分，取平均值。以校准曲线质量浓度为横坐标，计数值（cps）为纵坐标，绘制校准曲线，由工作站直接计算出待测溶液的浓度。
对每一元素，应测定可能影响数据的每一同位素（见表2），以减少干扰造成的分析误差。
表2 每一元素应同时测定的同位素
注：下划线元素为方法推荐的用于定量的同位素质量数
5.3空白试验
除不称取样品外，按以上步骤进行。
5.4平行试验
按以上步骤，做两份样品的平行测定。
6 结果计算
（r1-r0）* v
w（稀土元素）= ----------------------------------------
m * 1000
式中： w（稀土元素）--样品中稀土元素的质量分数，μg/g；
r1 --测试液中稀土元素的质量浓度，ng/ml；
r0 --空白溶液中稀土元素的质量浓度，ng/ml；
v --样品消化液总体积，ml；
m --样品质量，g。
7 精密度和准确度
根据不同物理形态样品中15种稀土元素的含量不同，在水、膏、霜状样品中加入质量浓度为0.5μg/l和 10μg/l混合稀土标准溶液，在粉状样品中加入质量浓度为5μg/l和 10μg/l混合稀土标准溶液。低浓度的rsd（%）在1.45%～7.71%之间，中浓度的rsd（%）在1.63%～7.93%之间，高浓度的rsd（%）在1.61%～5.81%之间。低浓度加标回收率在89.3%～114. 6%之间，、中浓度加标回收率在97.2%～111. 0%之间，高浓度加标回收率在98.0%～109. 3%之间。
8 方法注释
注1：根据在线内标管与样品管的内径比，实际样品中加入内标液浓度为50μg /l（re＋rh）。
注2：可根据不同型号仪器选用合适的质谱调谐液。
注3：可根据不同型号微波消解仪器的特点选择适量的消解液及最佳消解条件进行样品消解。
注4：根据仪器型号的不同，选择适合的仪器最佳测定条件。
附件5：
化妆品中邻苯二甲酸酯类化合物的检测方法
1 范围
本方法规定了测定香水、发胶、指甲油等化妆品中10种邻苯二甲酸酯类化合物的高效液相色谱法。
本方法适用于香水、发胶、指甲油等化妆品中10种邻苯二甲酸酯类化合物的含量测定。
本方法所指的10种邻苯二甲酸酯类化合物包括邻苯二甲酸二甲酯（dmp）、邻苯二甲酸二乙酯 （dep）、邻苯二甲酸二正丙酯（dpp）、邻苯二甲酸二正丁酯（dbp）、邻苯二甲酸二正戊酯（dap）、邻苯二甲酸二正己酯（dhp）、邻苯二甲酸丁基苄酯（bbp）、邻苯二甲酸二环己酯（dchp）、邻苯二甲酸二正辛酯（dop）和邻苯二甲酸二异辛酯（dehp）。
本方法中各种邻苯二甲酸酯类化合物的检出限及取1g样品时的检出浓度见表1。
表1 各种邻苯二甲酸酯类化合物的检出限和检出浓度
2 原理
邻苯二甲酸酯类化合物在280nm处有特征紫外吸收，可用反相高效液相色谱（hplc）分离，并根据保留时间和紫外光谱图定性，峰面积定量。
3 试剂
3.1 甲醇，色谱纯。（溶剂应不含邻苯二甲酸酯类化合物）
3.2 邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二正丙酯、邻苯二甲酸丁基苄酯、邻苯二甲酸二正丁酯、邻苯二甲酸二正戊酯、邻苯二甲酸二环己酯、邻苯二甲酸二正己酯、邻苯二甲酸二异辛酯、邻苯二甲酸二正辛酯（纯度>97.5%）。
3.3 混合标准储备溶液（r=1 000mg/l）：分别称取10种邻苯二甲酸酯类化合物标准品0.05g（精确到0.1mg），用甲醇（3.1）溶解，移入50 ml容量瓶中，定容，摇匀，配成质量浓度为1 000mg/l的混合标准溶液。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器，配色谱工作站。
4.2 微量进样器或自动进样装置。
4.3 超声波清洗器。
4.4 高速离心机。
4.5 电子天平。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
称取样品约1g（精确至1mg）于10ml具塞刻度管中，加入甲醇（3.1）至刻度，振摇，超声提取20min，必要时可高速离心。经0.45mm滤膜过滤，滤液作为待测样液备用。
5.2 测定
5.2.1 色谱参考条件
5.2.1.1 色谱柱：c18 柱，250mm×4.6mm，5mm。
5.2.1.2 流动相：a相：甲醇，b相：水，梯度洗脱，洗脱程序见表2。
5.2.1.3 流速：1.0ml/min。
5.2.1.4 检测器：二极管阵列检测器，检测波长为280nm。
5.2.1.5 柱温：25℃或室温（无温控装置时适用）。
表2 流动相甲醇和水梯度洗脱程序（体积比）
5.2.2 校准曲线的制备
移取邻苯二甲酸酯类化合物标准储备溶液（3.3）0ml、1.00ml、2.00ml、4.00ml、6.00ml、8.00ml于10ml具塞刻度管中，用甲醇（3.1）稀释至刻度，摇匀。此时溶液中各组分浓度分别为0 mg/l、100 mg/l、200 mg/l、400 mg/l、600 mg/l和800 mg/l。在设定色谱条件下，分别取5ml进行hplc分析。根据标准系列质量浓度和峰面积，绘制校准曲线。
5.2.3 样品测定
在设定色谱条件下，进5ml待测样液进行高效液相色谱分析。若样品中待测组分含量过高，应用甲醇稀释后测定。色谱图检出的物质，经与该物质的标准紫外光谱图比较确证后，根据峰面积，从校准曲线上查得相应组分的质量浓度。
5.3 空白试验
除不称取样品外，按以上步骤进行。
5.4 平行试验
按以上步骤，做两份样品的平行测定。
6 结果计算
r ´ v
w（邻苯二甲酸酯）= --------------------------
m
式中：w（邻苯二甲酸酯）--化妆品中邻苯二甲酸酯的质量分数，mg/g；
r --从校准曲线上查得的待测样液中邻苯二甲酸酯的质量浓度，mg/l；
v --样品定容体积，ml；
m --样品用量，g。
7 色谱图（略）
8 阳性结果的确认
测定过程中如果有阳性结果，可采用气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法等进一步确证。
气相色谱参考条件：
色谱柱：hp-5ms或类似石英毛细管柱（30m×0.25mm i.d.，0.25mm）；进样口温度：250℃；色谱与质谱接口温度：280℃；柱温：程序升温，初始温度60℃（1min），以20℃/min上升至220℃（1min），再以5℃/min上升至280℃（4min）；载气：高纯氦气，流速1.0ml/min；进样方式：不分流进样，进样量：1.0ml。
质谱参考条件：
电离方式：电子轰击（ei）源；电离能量：70ev；溶剂延迟：5min；扫描方式：选择离子扫描（sim）
9 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的10%。
附录 邻苯二甲酸酯类化合物的信息表
附件6：
化妆品中三氯卡班的检测方法
1 范围
本方法规定了采用液相色谱法测定化妆品中三氯卡班（cas：101-20-2）含量的方法。
本方法适用于固体皂类、水类、乳液类等化妆品中三氯卡班含量的测定。
2 方法提要
样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对三氯卡班的检出限为0.0005 μg，定量下限为0.001 mg；若取样品0.25 g，本方法对三氯卡班的检出浓度为4.5 mg/g，最低定量浓度为7.5 mg/g。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。
3.1 三氯卡班，纯度>99.0%。
3.2 丙酮，色谱纯。
3.3 甲醇，色谱纯。
3.4 三氯卡班标准储备液（ρ = 0.5 g/l）：精密称取三氯卡班0.025 g（精确到0.0001 g）于50 ml容量瓶中，加入甲醇（3.3）溶解并定容至50 ml，即得质量浓度为0.5 mg/ml的三氯卡班标准储备溶液。
3.5 系列浓度三氯卡班标准溶液：按照表1操作，分别精密量取一定体积的三氯卡班标准储备溶液（3.4）和标准溶液于10 ml容量瓶中，以甲醇（3.3）稀释并定容至刻度，得系列浓度三氯卡班的标准溶液。
表1 三氯卡班系列标准溶液的配制
4 仪器
4.1高效液相色谱仪：具有紫外检测器。
4.2分析天平：感量0.0001g。
4.3超声波清洗器。
4.4微型涡旋振荡器。
5 测定步骤
5.1 样品处理
5.1.1 固体皂类化妆品
从中部切开样品，刮取断面样品（碎末状），准确称取0.25g，精确至0.001g，置于25 ml具塞比色管中，加入丙酮（3.2）5 ml，涡旋60s，分散均匀，超声（功率：400w）分散15 min，再加入甲醇（3.3）15 ml，超声（功率：400w）提取15 min，冷却到室温后，用甲醇（3.3）定容至25 ml刻度线，涡旋振荡摇匀，混液过0.45 mm滤膜，滤液可根据需要进行稀释，保存于2 ml棕色进样瓶中作为待测样液，备用。
5.1.2乳液和水类化妆品
准确称取试样0.25g，精确至0.001g，置于25 ml具塞比色管中，加入甲醇（3.3）20 ml，涡旋60s，分散均匀，超声（功率：400w）提取15 min，冷却到室温后，用甲醇（3.3）定容至25 ml刻度线，涡旋振荡摇匀，混液过0.45 mm滤膜，滤液可根据需要进行稀释，保存于2 ml棕色进样瓶中作为待测样液，备用。
5.2 色谱条件
色谱柱：c18 柱，250 mm×4.6mm i.d.，5 mm，或等效色谱柱；
流动相：甲醇 ＋ 水（88 ＋ 12）；
流速：1.0 ml/min；
检测波长：281 nm；
柱温：25 ℃；
进样量：20 ml。
5.3 测定
在5.2色谱条件下，取系列浓度的标准溶液（3.5）分别进样，进行色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下处理得到的待测溶液进样20 μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算三氯卡班的质量浓度。按“6计算”，计算样品中三氯卡班的含量。
5.4 平行实验
按以上步骤操作，对同一样品独立进行平行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
6 计算（略）
7 回收率和精密度
多家实验室验证的平均回收率为91～106%，相对标准偏差小于3%。
8 色谱图（略）
附件7：
化妆品中苯氧异丙醇的检测方法
1 范围
本方法规定了采用液相色谱法测定化妆品中苯氧异丙醇（cas：770-35-4）含量的方法。
本方法适用于淋洗类化妆品（包括乳液和水类，不包括口腔卫生用品）中苯氧异丙醇含量的测定。
2 方法提要
样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，主峰峰面积定量（杂质峰的分离度r>1.5），以标准曲线法计算含量。本方法对苯氧异丙醇的检出限为0.0008 μg，定量下限为0.0012 mg；若取样品0.25 g，本方法对苯氧异丙醇的检出浓度为5.0 mg/g，最低定量浓度为8.0 mg/g。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。
3.1苯氧异丙醇，纯度>93.0%。
3.2 乙腈，色谱纯。
3.3 甲醇，色谱纯。
3.4 四氢呋喃（thf），色谱纯。
3.5 流动相溶剂，水＋乙腈＋甲醇＋thf（60 ＋ 25 ＋ 10 ＋ 5）。
3.6 苯氧异丙醇标准储备液（ρ = 1.0 g/l，质量浓度根据纯度折算）：精密称取苯氧异丙醇，精确到0.0001 g，于50 ml容量瓶中，加入甲醇（3.3）溶解并定容至50 ml，配制得质量浓度为1.0 mg/ml的苯氧异丙醇标准储备溶液。
3.7 系列浓度苯氧异丙醇标准溶液：按照表1操作，分别精密量取一定体积的苯氧异丙醇标准储备溶液（3.6）和标准溶液于10 ml容量瓶中，以甲醇（3.3）稀释并定容至刻度，得系列浓度苯氧异丙醇的标准溶液。
表1 苯氧异丙醇系列标准溶液的配制
4 仪器
4.1高效液相色谱仪：具有紫外检测器。
4.2分析天平：感量0.0001g。
4.3超声波清洗器。
4.4微型涡旋振荡器。
5 测定步骤
5.1 样品处理
准确称取试样0.25g，精确至0.001g，置于25 ml具塞比色管中，加入甲醇（3.3）20 ml，涡旋60s分散均匀，超声（功率：400w）提取15 min，冷却到室温后，用流动相溶剂（3.5）定容至25 ml刻度线，涡旋振荡摇匀，混液过0.45 mm滤膜，滤液可根据需要进行稀释，保存于2 ml棕色进样瓶中作为待测样液，备用。
5.2 色谱条件
色谱柱：c18 柱，250 mm×4.6mm i.d.，5 mm，或等效色谱柱；
流动相：水＋乙腈＋甲醇＋thf（60 ＋ 25 ＋ 10 ＋ 5）；
流速：1.2 ml/min；
检测波长：268 nm；
柱温：30 ℃；
进样量：20 ml。
5.3 测定
在5.2色谱条件下，取系列浓度的标准溶液（3.7）分别进样，进行色谱分析，以主峰定量，杂质峰的分离度r>1.5；以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取5.1项下处理得到的待测溶液进样20 μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算苯氧异丙醇的质量浓度。按6计算样品中苯氧异丙醇的含量。
5.4 平行实验
按以上步骤操作，对同一样品独立进行平行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
6 计算（略）
7 回收率和精密度
多家实验室验证的平均回收率为96～107%，相对标准偏差小于3%。
8 色谱图（略）
附件8：
化妆品中奎宁的检测方法
1 范围
本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中奎宁（cas：130-95-0）含量的方法。
本方法适用于淋洗型香波、驻留型护发类化妆品中奎宁含量的测定。
2 方法提要
试样采用甲醇超声提取，上清液经滤膜过滤用液相色谱分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对奎宁的检出限为0.00156mg，定量下限为0.005 mg。若取0.25g样品，本方法对奎宁的检出浓度为16.7ug/g，最低定量浓度为56ug/g。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。
1.1甲醇，色谱纯。
1.2磷酸氢二铵，色谱纯。
1.3奎宁，纯度≥98%。
3.4奎宁标准储备液：取奎宁约 0.0500g，精确到0.0001g，置50 ml棕色容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容至刻度，摇匀，配成质量浓度为1.0 g/l的标准储备溶液。
3.5奎宁标准工作溶液：精密配制浓度分别为1.0 mg/ml、10.0 mg/ml、30.0 mg/ml、80.0 mg/ml、120.0 mg/ml和200.0 mg/ml的系列奎宁标准工作溶液。
4 仪器
4.1高效液相色谱仪：具有紫外检测器。
4.2微型涡旋混合仪。
4.3超声波清洗器。
4.4分析天平：感量0.0001g。
4.5微量进样器，50ml或100ml。
5 测定步骤
5.1 样品前处理
准确称取混匀的试样约0.250g，精确至0.001g，置于25ml具塞刻度管中，加入20 ml甲醇（3.1），涡旋1 min，振摇，超声（功率：400w）提取30 min，取出后冷却至室温，用甲醇（3.1）定容至25 ml刻度线，涡旋振荡摇匀，取上层液经0.45 mm滤膜过滤，滤液作为待测样液，备用。
5.2测定
5.2.1色谱条件
色谱柱：c18 柱，250 mm×4.6mm，5 mm；
流动相：甲醇＋0.01mol/l（nh4）2hpo4（90＋10）；
流速：1.0 ml/min；
检测波长：328 nm；
柱温：30℃；
进样量：20ml。
5.2.2 测定方法
取标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标进行线性回归，建立标准工作曲线。取“5.1”项下处理得到的待测溶液进样，根据测定成分的峰面积，代入标准工作曲线上得出奎宁的质量浓度。按“6计算”，计算试样中奎宁的含量。
5.3 平行实验
按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
6 计算（略）
7 精密度与准确度
多家实验室验证的回收率为90～115%，相对标准偏差小于7%。
8 色谱图（略）
附件9：
化妆品中6-甲基香豆素的检测方法
高效液相色谱法
1 范围
本方法规定了用高效液相色谱法测定化妆品中6-甲基香豆素的含量。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中6-甲基香豆素的测定。
暂无实验数据表明本方式适用于蜡质类化妆品中6-甲基香豆素含量的测定。
2 方法提要
样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。必要时，采用气相色谱-质谱（gc/ms）进行确证。本方法对6-甲基香豆素的检出限为0.00005µg，定量下限为0.00017µg。若取1g样品，本方法对6-甲基香豆素的检出浓度为0.000005%，最低定量浓度为0.000017%。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。
3.1 甲醇：色谱纯。
3.2 6-甲基香豆素，纯度≥99.0%。
3.3 磷酸二氢钠
3.4 磷酸二氢钠缓冲溶液[c（nah2po4）=0.02mol/l，ph =3.5）：称取3.12g磷酸二氢钠，加水溶解并稀释至1000ml，磷酸调ph值至3.5。
3.5 6-甲基香豆素标准储备溶液[ （6-甲基香豆素）=1.0g/l）]：精密称取6-甲基香豆素0.1000g于100 ml容量瓶中，加甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度，即得标准储备溶液（浓度为1g/l）。
3.6 系列浓度6-甲基香豆素标准溶液：精密量取标准储备溶液（3.5）5ml置于50ml量瓶中，即得100μg/ ml的标准溶液，再分别精密量取0.1 ml，0.5 ml，1.0 ml，3.0 ml，5.0 ml，10 ml于100ml的量瓶中，加甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度。即得浓度分别为0.1μg/ ml、0.5μg/ ml、1.0μg/ ml、3.0μg/ ml、5.0μg/ ml、10.0μg/ ml的标准溶液。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪：具紫外检测器。
4.2 气相色谱-质谱仪。
4.3 分析天平：感量为0.01g。
4.4 分析天平：感量为0.00001g。
4.5 容量瓶：10ml、100ml。
4.6 具塞刻度离心试管：10ml。
4.7 涡旋振荡器。
4.8 超声波清洗仪。
4.9 离心机：转速不小于5000r/min。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取1.0g（精确至0.01g）样品于10ml容量瓶中，加入5ml甲醇（3.1），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20min，冷却至室温后，用甲醇（3.1）稀释至刻度，混匀后转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为样品溶液备用。若样品中6-甲基香豆素的浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2 色谱条件
a）色谱柱：c18柱（ 250mm×4.6mm，5μm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂）；
b）流动相：甲醇-磷酸二氢钠缓冲溶液（3.4）；
梯度洗脱参考条件见下表：
注：梯度洗脱条件，操作者可根据样品的不同选择最佳条件，使6-甲基香豆素与其他组分峰获得完全分离。
c） 流速：1ml/min；
d） 检测波长：275nm；
e） 柱温：35℃；
f）进样量：10µl。
5.3 测定
按“5.2”项下色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.6）分别进样，进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1” 项下样品溶液进样10μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算6-甲基香豆素的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中6-甲基香豆素的含量。
6-甲基香豆素标准溶液高效液相色谱图参见附录a的图a.1。
5.4 阳性结果确证
必要时，采用气相色谱-质谱确证阳性检测结果，以检查化妆品中是否有其它物质干扰6-甲基香豆素的测定。如果检出的色谱峰的保留时间与标准品一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且所选择的离子的相对丰度比与标准物质相一致，则可判断样品中存在6-甲基香豆素。
气相色谱-质谱（gc/ms）参考条件：
a）色谱柱：hp-5ms 毛细管柱（30m×0.32mm×0.25µm，5%-苯基-甲基聚硅氧烷）或相当者；
b）柱温程序：初始温度100℃，保持3min，后以8℃/min 的速率升至 200℃，保持 3min；
c）进样口温度：250℃；
d） 接口温度：280℃；
e）载气：氦气1.0 ml/min；
f）电离方式：ei；
g）电离能量：70ev；
h）监测方式：全扫描；
i）监视离子范围（m/z）：40～200；
j） 进样方式：不分流进样；
k） 进样量：1.0µl。
6-甲基香豆素的全扫描图参见附录c的图c.1；质谱图参见附录c的图c.2。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.001%～0.005%范围内，测定结果的平均回收率在92.2%～103.5%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
气相色谱法
1 范围
本方法规定了用气相色谱法测定化妆品中6-甲基香豆素的含量。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中6-甲基香豆素的测定。
暂无实验数据表明本方式适用于蜡质类化妆品中6-甲基香豆素含量的测定。
2 方法提要
样品在经过提取后，经气相色谱仪分离，氢火焰离子化检测器（fid）检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。必要时，采用气相色谱-质谱（gc/ms）进行确证。本方法对6-甲基香豆素的检出限为0.00013µg，定量下限为0.0005µg。若取1g样品，本方法对6-甲基香豆素的检出浓度为0.00013%，最低定量浓度为0.0005%。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯。
3.1 甲醇：色谱纯。
3.2 无水硫酸钠：于650℃灼烧4h，储于密闭干燥器中备用。
3.3 6-甲基香豆素：纯度≥99.0%。
3.4 6-甲基香豆素标准储备溶液[ （6-甲基香豆素）=1.0g/l）]：精密称取6-甲基香豆素0.1000g于100 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得标准储备溶液（浓度为1g/l）。
3.5 系列浓度6-甲基香豆素标准溶液：精密量取标准储备溶液（3.5）5ml置于50ml量瓶中，即得100μg/ ml的标准溶液，再分别精密量取0.5 ml，1.0 ml，3.0 ml，5.0 ml，10 ml于100ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。即得浓度分别为0.5μg/ ml、1.0μg/ ml、3.0μg/ ml、5.0μg/ ml、10.0μg/ ml的标准溶液。
4 仪器
4.1 气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器（fid）。
4.2 分析天平：感量为0.01g。
4.3 分析天平：感量为0.00001g。
4.4 容量瓶：10ml、100ml。
4.5 具塞刻度离心试管：10ml。
4.6 涡旋振荡器。
4.7 超声波清洗仪。
4.8 离心机：转速不小于5000r/min。
4.9 注射式样品过滤器（有机溶媒型，0.45μm）。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取1.0g（精确至0.01g）样品于10ml容量瓶中，加入5ml甲醇（3.1），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20min，冷却放置室温，用甲醇（3.1）稀释至刻度，混匀后转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经3g无水硫酸钠（3.2）脱水，经0.45μm滤膜过滤，滤液作为样品溶液备用。若样品中6-甲基香豆素的浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2 色谱条件
a）色谱柱：hp-5 毛细管柱（30m×0.32mm×0.25µm，5%-苯基-甲基聚硅氧烷）或相当者；
b） 柱温程序：初始温度100℃，保持3min，后以8℃/min 的速率升至 200℃，保持 3min；
c） 进样口温度：250℃；
d） 检测器温度：280℃；
e） 载气：氮气1.0 ml/min（纯度为99.999%）；
f） 燃气：氢气30 ml/min；
g） 助燃气：空气400 ml/min；
h） 尾吹n2流量：30 ml/min；
i） 进样方式：不分流进样；
j） 进样量：1.0µl。
注：载气、空气、氢气流速随仪器而异，操作者可根据仪器及色谱柱等差异，通过试验选择最佳操作条件，使6-甲基香豆素与其他组分峰获得完全分离。
5.3 测定
按“5.2.1”项下色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.5）分别进样，进行气相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1” 项下样品溶液进样1.0μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算6-甲基香豆素的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中6-甲基香豆素的含量。必要时用第一法佐证。
6-甲基香豆素标准溶液气相色谱图参见附录a的图a.1。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.001%～0.005%范围内，测定结果的平均回收率在96.3%～103.5%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
附录a （资料性附录）液相色谱图示例（略）
附录b （资料性附录）气相色谱图示例（略）
附录c （资料性附录）gc/ms示例（略）
图c.1 6-甲基香豆素标准溶液的gc/ms全扫描图（略）
图c.2 6-甲基香豆素标准溶液的gc/ms质谱图（略）
表c.1 6-甲基香豆素特征离子表
附件10：
化妆品中苯甲醇的检测方法
气相色谱法
1 范围
本方法规定了采用气相色谱法测定化妆品中防腐剂苯甲醇（cas：100-51-6）含量的方法。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中苯甲醇含量的测定。
暂无实验数据表明本方法适用于蜡质类化妆品中苯甲醇含量的测定。
2 方法提要
样品经过提取后，采用气相色谱仪分离，氢火焰离子化检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法的检出限为0.0012μg，定量下限为0.0039μg。若取1.0g样品，本方法对苯甲醇的检出浓度为0.0012%，最低定量浓度为0.004%。
必要时，采用气相色谱-质谱（gc/ms）确证。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯。
3.1 无水乙醇。
3.2 苯甲醇，纯度≥99.5%。
3.3 苯甲醇标准储备液［ （苯甲醇）=1.0g/l］：精密称取苯甲醇标准品0.1000g于100ml的容量瓶中，用无水乙醇（3.1）溶解并稀释至刻度。即得质量浓度为1.0mg/ml的苯甲醇标准储备溶液。该储备液应在0℃～4℃冰箱冷藏保存。
3.4 系列浓度苯甲醇标准溶液：分别精密量取一定体积的苯甲醇标准储备溶液（3.3）于10ml量瓶中，以无水乙醇（3.1）稀释并定容至刻度，得系列浓度为0.05mg/ml 、0.10mg/ml、0.20mg/ ml、0.30g/ml、0.40mg/ml、0.50mg/ml的标准溶液。
4 仪器和设备
4.1 气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器（fid）、质谱检测器（msd）。
4.2 分析天平：感量为0.0001g。
4.3 分析天平：感量为0.01g。
4.4 容量瓶：10ml、100ml。
4.5 具塞刻度离心试管：10ml。
4.6 涡旋振荡器。
4.7 恒温水浴锅。
4.8 超声波清洗仪。
4.9 离心机：转速不小于5000r/min。
4.10 注射式样品过滤器（有机溶媒型，0.45μm）。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取0.5g～1.0g（精确至0.01g）样品于10ml容量瓶中，加入5ml无水乙醇（3.1），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，置于50℃水浴中加热5min（液体类样品不需水浴加热），超声提取20min，冷却至室温后，用无水乙醇（3.1）稀释至刻度，混匀后转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
若样品中苯甲醇的质量浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2 色谱条件
5.2.1 气相色谱（gc/fid）参考条件
a） 色谱柱：hp-ffap石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm，硝基对苯二酸改性的聚乙二醇），或相当者；
b）柱温程序：初始温度150℃，以10℃/min的速率升温至180℃，保持3min后，再以20℃/min的速率升温至230℃，保持5min；
c）进样口温度：240℃；
d） 检测器温度：250℃；
e）载气：n2，流速：1.0ml/min；
f）氢气流量：40ml/min；
g） 空气流量：400ml/min；
h） 尾吹气氮气流量：30ml/min；
i） 进样方式：分流进样，分流比：40：1；
j） 进样量：1µl。
注：载气、空气、氢气流速随仪器而异，操作者可根据仪器及色谱柱等差异，通过试验选择最佳操作条件，使苯甲醇与化妆品中其他组分峰获得完全分离。
5.2.2 气相色谱-质谱（gc/ms））参考条件
a）色谱柱：hp-ffap石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm，硝基对苯二酸改性的聚乙二醇）或相当者；
b）柱温程序：程序升温：初始温度150℃，以10℃/min的速率升温至180℃，保持3min后，再以20℃/min的速率升温至230℃，保持5min；
c） 进样口温度：230℃；
d） 接口温度：240℃；
e） 载气：氦气1.0 ml/min；
f）电离方式：ei；
g）电离能量：70ev；
h） 监测方式：全扫描；
i）监视离子范围（m/z）：20～110；
j）进样方式：分流进样，分流比：40：1
k）进样量：1.0µl。
5.3 测定
按“5.2.1”项下色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.4）分别进样，进行气相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下样品待测溶液进样1μl，将测定成分的峰面积，代入回归方程计算苯甲醇的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中苯甲醇的含量。
苯甲醇标准溶液气相色谱图参见附录a的图a.1。
5.4 确证
必要时，采用气相色谱-质谱确证阳性结果，以检查化妆品中是否有其它物质干扰苯甲醇的测定。气相色谱-质谱条件参见（5.2.2），如果检出的色谱峰的保留时间与标准物质的保留时间一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且所选择的离子的相对丰度比与标准物质的相对丰度比一致，则可判断样品中存在苯甲醇。
苯甲醇的全扫描图参见附录c的图c.1；
苯甲醇的质谱图参见附录c的图c.2。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.05%～0.5%范围内，测定结果的平均回收率在97.9%～108.7%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
高效液相色谱法
1 范围
本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中防腐剂苯甲醇（cas：100-51-6）含量的方法。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中苯甲醇含量的测定。
暂无实验数据表明本方法适用于蜡质类化妆品中苯甲醇含量的测定。
2 方法提要
样品在经过提取后，采用高效液色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对苯甲醇的检出限为0.000005μg，定量下限为0.00002μg。若取1.0g样品，本方法对苯甲醇的检出浓度为0.0000005%；最低定量浓度为0.000002%。
3 试剂和材料
水为超纯水。
3.1 甲醇：色谱纯。
3.2 苯甲醇，纯度≥99.5%。
3.3 苯甲醇标准储备液［ （苯甲醇）=1.0g/l］：精密称取苯甲醇标准品0.1000g于100ml的容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度。即得质量浓度为1.0mg/ml的苯甲醇标准储备溶液。该储备液应在0℃～4℃冰箱冷藏保存。
3.4 系列浓度苯甲醇标准溶液：分别精密量取一定体积的苯甲醇标准储备溶液（3.3）于10ml量瓶中，以甲醇（3.1）稀释并定容至刻度，得系列浓度为0.05mg/ml 、0.10mg/ml、0.20mg/ ml、0.30g/ml、0.40mg/ml、0.50mg/ml的标准溶液。
4 仪器和设备
4.1 液相色谱仪：具紫外检测器。
4.2 分析天平：感量为0.0001g。
4.3 分析天平：感量为0.01g。
4.4 容量瓶：10ml、100ml。
4.5 具塞刻度离心试管：10ml。
4.6 涡旋振荡器。
4.7 超声波清洗仪。
4.8 离心机：转速不小于5000r/min。
4.9 恒温水浴锅。
4.10 注射式样品过滤器（有机溶媒型，0.45μm）。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取0.5g～1.0g（精确至0.01g）样品于10ml容量瓶中，加入5ml甲醇（3.1），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，置于50℃水浴中加热5min（液体类样品不需水浴加热），超声提取20min，冷却至室温后，用甲醇（3.1）稀释至刻度，混匀后转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
若样品中苯甲醇的质量浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2 色谱条件
a）色谱柱：c18柱（250mm ×4.6mm，5μm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂）；
b）流动相：甲醇-水，梯度洗脱参考条件见下表：
注：梯度洗脱条件，操作者可根据样品的不同选择最佳条件，使苯甲醇与化妆品中其他组分峰获得完全分离。
c） 流速：1.0ml/min；
d） 检测波长：210nm；
e） 柱温： 35℃；
f） 进样量：10μl。
5.3 测定
按“5.2”项下色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.4）分别进样，进行液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下样品待测溶液进样10μl，将测定成分的峰面积，代入回归方程计算苯甲醇的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中苯甲醇的含量。
苯甲醇标准溶液高效液相色谱图参见附录b的图b.1。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.05%～0.5%范围内，测定结果的平均回收率在91.9%～102.7%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
附录a （资料性附录）气相色谱图示例（略）
图a.1 苯甲醇标准溶液的气相色谱图（略）
附录b （资料性附录）高效液相色谱图示例（略）
图b.1 苯甲醇标准溶液的高效液相色谱图（略）
附录c （资料性附录）gc/ms示例（略）
图c.1 苯甲醇标准溶液的gc/ms全扫描色谱图（略）
图c.2 苯甲醇标准溶液的gc/ms质谱图（略）
表c.1 苯甲醇特征离子表
附件11：
化妆品中苯甲酸及其盐的检测方法
高效液相色谱法
1 范围
本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中防腐剂苯甲酸（cas：65-85-0）及其钠盐（以苯甲酸计）含量的方法。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中苯甲酸及其钠盐的测定。
暂无实验数据表明本方法适用于蜡质类化妆品中苯甲酸及其钠盐含量的测定。
2 方法提要
试样经酸化后，用乙醇和水的混合溶液，经水浴、超声提取，采用高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法的检出限为0.000225μg，定量下限为0.00075μg。若取1.0g样品，本方法对苯甲酸的检出浓度为0.0001%；最低定量浓度为0.0004%。
必要时，采用气相色谱-质谱（gc/ms）确证。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。
3.1 无水乙醇。
3.2 磷酸二氢钠。
3.3 磷酸。
3.4 硫酸。
3.5 硫酸〔c（1/2h2so4） =2 mol/l〕：取 6ml硫酸（3.4）缓缓注入100ml水中，冷却摇匀。
3.6 乙醇-水混合液：取90ml无水乙醇和10ml水混合摇匀。
3.7 磷酸二氢钠缓冲溶液（0.02mol/l，ph=2.2）： 称取3.12g磷酸二氢钠，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调ph值至2.2。
3.8 甲醇，色谱纯。
3.9 苯甲酸，纯度≥99.5%。
3.10 苯甲酸标准储备液［ （苯甲酸）=1.0g/l］：精密称取苯甲酸0.1000g于100ml容量瓶中，用乙醇-水混合液（3.6）溶解并稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/ml的苯甲酸标准储备溶液。该储备液应在0℃～4℃冰箱冷藏保存。
3.11 系列浓度苯甲酸标准溶液：分别精密量取一定体积的苯甲酸标准储备溶液（3.10）于10ml量瓶中，以乙醇-水混合液（3.6）稀释并定容至刻度，得系列浓度为0.05mg/ml 、0.10mg/ml、0.20mg/ ml、0.30g/ml、0.40mg/ml、0.50mg/ml的标准溶液。
4 仪器和设备
4.1 液相色谱仪：具紫外检测器。
4.2 气相色谱-质谱仪。
4.3 分析天平：感量为0.0001g。
4.4 分析天平：感量为0.01g。
4.5 涡旋振荡器。
4.6 恒温水浴锅。
4.7 超声波清洗仪
4.8 离心机：转速不小于5000r/min。
4.9 酸度计。
4.10 容量瓶：10ml、50 ml、100ml
4.11 具塞刻度离心试管：10ml。
4.12 注射式样品过滤器（有机溶媒型，0.45μm）。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取0.5g～1.0g（精确至0.01g）样品于50ml容量瓶中，加入1ml硫酸〔c（1/2h2so4） =2 mol/l〕（3.5），30ml乙醇-水混合液（3.6），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，置于50℃水浴中加热5min，超声提取20min。冷却至室温后，用乙醇-水混合液稀释至刻度，在冰浴中放置1h，取出至室温后转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
若样品中苯甲酸的质量浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2色谱条件
a）色谱柱：c18柱（250mm ×4.6mm，5μm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂）；
b）流动相：甲醇-磷酸二氢钠缓冲液（0.02mol/l ，磷酸调ph为2.2）（3.7），梯度洗脱参考条件见下表：
注：梯度洗脱条件，操作者可根据实际样品的不同选择最佳条件，使苯甲酸与化妆品中其他组分峰获得完全分离。
c）流速：1.0ml/min；
d）检测波长：230nm；
e）柱温：35℃；
f）进样量：10μl。
5.3 测定
按“5.2”项下色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.11）分别进样，进行液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下样品待测溶液进样10μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算苯甲酸的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中苯甲酸及其钠盐（以苯甲酸计）的含量。
苯甲酸标准溶液高效液相色谱图参见附录a的图a.1。
5.4 确证
必要时，采用气相色谱-质谱确证阳性结果，以检查化妆品中是否有其它物质干扰苯甲酸的测定。如果检出的色谱峰的保留时间与标准物质的保留时间一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且所选择的离子的相对丰度比与标准物质的相对丰度比一致，则可判断样品中存在苯甲酸或苯甲酸钠。
气相色谱-质谱参考条件
a）色谱柱：hp-ffap石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm，硝基对苯二酸改性的聚乙二醇）或相当者；
b）柱温程序：初始温度150℃，以10℃/min的速率升温至180℃，保持3min后，再以20℃/min的速率升温至230℃，保持5min；
c）进样口温度：230ºc；
d）接口温度：240 ºc；
e）载气：氦气1.0 ml/min；
f）电离方式：ei；
g）电离能量：70ev；
h）监测方式：全扫描；
i）监视离子范围（m/z）：20～130；
j）进样方式：分流进样，分流比：40：1
k）进样量：1.0µl。
苯甲酸的全扫描图参见附录c的图c.1；
苯甲酸的质谱图参见附录c的图c.2。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.05%～0.5%范围内，测定结果的平均回收率在92.5%～104.9%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
气相色谱法
1 范围
本方法规定了用气相色谱法测定化妆品中防腐剂苯甲酸（cas：65-85-0）及其钠盐的含量。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中苯甲酸及其钠盐含量的测定。
暂无实验数据表明本方法适用于蜡质类化妆品中苯甲酸及其钠盐（以苯甲酸计）含量的测定。
2 方法提要
试样经酸化后，用乙醚低温超声提取，提取溶液除去乙醚，残渣用无水乙醇溶解定容，离心，取上清液经滤膜过滤，采用气相色谱仪分离，氢火焰离子化检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法的检出限为0.0025μg，定量下限为0.0083μg。若取1.0g样品，本方法对苯甲酸的检出浓度为0.0025%，最低定量浓度为0.0083%。
3 试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯。水为超纯水。
3.1 无水乙醇。
3.2 乙醚。
3.3 盐酸。
3.4 盐酸-水混合液：取50ml盐酸（3.3）和50ml水混合摇匀。
3.5 苯甲酸，纯度≥99.5%。
3.6 苯甲酸标准储备液［ （苯甲酸）=1.0g/l］：精密称取苯甲酸标准品0.1000g于100ml的容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/ml的苯甲酸标准储备溶液。该储备液应在0℃～4℃冰箱冷藏保存。
3.7 系列浓度苯甲酸标准溶液：分别精密量取一定体积的苯甲酸标准储备溶液（3.6）于10ml量瓶中，以无水乙醇（3.1）稀释并定容至刻度，得系列浓度为0.05mg/ml 、0.10mg/ml、0.20mg/ ml、0.30g/ml、0.40mg/ml、0.50mg/ml的标准溶液。
4 仪器和设备
4.1 气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器（fid）。
4.2 分析天平：感量为0.0001g。
4.3 分析天平：感量为0.01g。
4.4 涡旋振荡器。
4.5 超声波清洗仪。
4.6 恒温水浴锅。
4.7 离心机：转速不小于5000r/min。
4.8 容量瓶：5ml、100ml。
4.9 具塞试管：50ml。
4.10 具塞刻度离心试管：10ml。
4.11 蒸发皿：50 ml。
4.12 注射式样品过滤器（有机溶媒型，0.45μm）。
5 测定步骤
5.1 样品处理
液体类化妆品：称取0.5g～1.0g（精确至0.01g）试样于50ml具塞试管中，加0.5ml盐酸-水混合液（3.4）和20.0ml乙醚（3.2），盖上塞子，称重，涡旋振摇使试样与提取溶剂充分混匀，冰浴超声提取20min，用乙醚（3.2）补足重量，混匀后静置至溶液分层，准确移取上清液10.0ml于50ml蒸发皿中，40℃水浴蒸至近干，残渣用无水乙醇（3.1）转移至5ml容量瓶定容，混匀，再转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min，上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
膏霜、乳、粉类化妆品：称取0.5g～1.0g（精确至0.01g）试样于50ml具塞试管中，加1ml纯水振摇后加入0.5ml盐酸-水混合液（3.4）及20.0ml乙醚（3.2），盖上塞子，称重，涡旋振摇使试样与提取溶剂充分混匀，冰浴超声提取20min，用乙醚（3.2）补足重量，混匀后静置至溶液分层，准确移取上清液10.0ml于50ml蒸发皿中，40℃水浴蒸至近干，残渣用无水乙醇转（3.1）移至5ml容量瓶定容，混匀，再转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min，上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
若样品中苯甲酸的质量浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2 色谱条件
a）色谱柱：hp-ffap石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm，硝基对苯二酸改性的聚乙二醇），或相当者；
b）柱温程序：初始温度150℃，以10℃/min的速率升温至180℃，保持3min后，再以20℃/min的速率升温至230℃，保持5min；
c）进样口温度：240℃；
d）检测器温度：250℃；
e）载气：n2，流速：1.0ml/min；
f）氢气流量：40 ml/min；
g）空气流量：400 ml/min；
h）尾吹气氮气流量：30 ml/min；
i）进样方式：分流进样，分流比：40：1；
j）进样量：1µl。
注：载气、空气、氢气流速随仪器而异，操作者可根据仪器及色谱柱等差异，通过试验选择最佳操作条件，使苯甲酸与化妆品中其他组分峰获得完全分离。
5.3 测定
按“5.2”项下的色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.7）分别进样，进行气相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下样品待测溶液进样1μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算苯甲酸的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中苯甲酸及其钠盐（以苯甲酸计）的含量。必要时用第一法佐证。
苯甲酸标准溶液气相色谱图参见附录b的图b.1。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.05%～0.5%范围内，测定结果的平均回收率在90.3%～107.7%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
附录a （资料性附录）高效液相色谱图示例（略）
图a.1 苯甲酸标准溶液的高效液相色谱图（略）
附录b（资料性附录） 气相色谱图示例（略）
图b.1 苯甲酸标准溶液气相色谱图（略）
附录c（资料性附录） gc/ms示例（略）
图c.1 苯甲酸标准溶液的全扫描图（略）
图c.2 苯甲酸标准溶液的质谱图（略）
表1 苯甲酸特征离子表
为规范化妆品中禁用物质和限用物质检测技术要求，提高化妆品卫生质量安全，化妆品中丙烯酰胺等禁用物质或限用物质的检测方法已经国家食品药品监督管理局化妆品标准专家委员会审议通过，现予印发。
附件：1．化妆品中丙烯酰胺的检测方法
2．化妆品中甲醛的检测方法
3．化妆品中挥发性有机溶剂的检测方法
4．化妆品中钕等15种稀土元素的检测方法
5．化妆品中邻苯二甲酸酯类物质的检测方法
6．化妆品中三氯卡班的检测方法
7．化妆品中苯氧异丙醇的检测方法
8．化妆品中奎宁的检测方法
9．化妆品中6-甲基香豆素的检测方法
10．化妆品中苯甲醇的检测方法
11．化妆品中苯甲酸及其盐的检测方法
国家食品药品监督管理局
二○一一年二月二十一日
附件1：
化妆品中丙烯酰胺的检测方法
1 范围
本方法规定了采用液相色谱-串联质谱法测定化妆品中丙烯酰胺单体（cas：79-06-1）的方法。
本方法适用于化妆品中丙烯酰胺单体含量的测定。
2 方法提要
样品经过提取后，用液相色谱-串联质谱法测定，以多反应离子监测模式进行监测，采用特征离子丰度比进行定性，丙烯酰胺与内标峰面积比定量。本方法对丙烯酰胺的检出限为0.00005 µg，定量下限为0.0002 µg；若取0.2 g样品测定，本方法对丙烯酰胺的检出浓度为0.005 mg/kg，最低定量浓度为0.025 mg/kg。
3 试剂
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。
3.1 丙烯酰胺，纯度 ≥ 99.0 %。
3.2 氘代丙烯酰胺（2，3，3-d3），纯度 ≥ 98 %。
3.3 醋酸铵。
3.4 乙腈，色谱纯。
3.5 甲醇，色谱纯。
3.6 空白化妆品样品：选择不含丙烯酰胺的化妆品作为空白样品。
3.7 乙腈溶液[φ（乙腈）= 10%]：量取10 ml乙腈（3.4）置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
3.8 醋酸铵溶液[c（醋酸铵）= 0.02 mol/l]：称取醋酸铵0.08 g，置50 ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，即得浓度约为0.02 mol/l的醋酸铵溶液。
3.9 丙烯酰胺标准储备溶液[r（丙烯酰胺）= 0.5 g/l]： 称取丙烯酰胺标准品（3.1）50 mg（精确到0.1 mg）置100 ml量瓶中，加乙腈溶液（3.7）使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.5 g/l的丙烯酰胺标准储备溶液。
3.10丙烯酰胺系列标准溶液：按照表1操作，分别精密量取一定体积的丙烯酰胺标准储备溶液（3.9）置10 ml量瓶中，以乙腈溶液（3.7）稀释并定容至刻度，得不同浓度的丙烯酰胺系列标准溶液。
3.11内标工作溶液：称取氘代丙烯酰胺标准品10 mg（精确到0.1 mg）置100 ml量瓶中，加乙腈溶液（3.7）使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为100 μg/ml的氘代丙烯酰胺储备溶液，然后精密量取氘代丙烯酰胺储备溶液1ml置50 ml量瓶中，加乙腈溶液（3.7）使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为2 μg/ml的氘代丙烯酰胺内标工作溶液。
3.12 丙烯酰胺加入空白样品标准溶液：取空白化妆品样品6份，每份约0.20 g（精确至0.001 g）于5 ml塑料离心管中，分别加浓度为2 μg/ml的内标溶液50 μl，涡旋30 s，再分别加丙烯酰胺系列标准溶液50 μl，涡旋30 s；然后加0.15 ml 0.02 mol/l的醋酸铵水溶液，涡旋30 s。再加2.0 ml乙腈，涡旋60 s后，以10000 rpm离心转速10 min，取上清液，氮气吹干，残渣加2 ml色谱流动相复溶，涡旋60 s，以10000 rpm转速离心5 min，取上清液， 经0.45 μm微孔滤膜过滤后，滤液作为待测液，备用，使得每克样品中含有丙烯酰胺0.025 μg、0.05 μg、0.25 μg、 1.25 μg、12. 5 μg、25 μg。
4 仪器
4.1 液相色谱-三重串联四极杆质谱联用仪。
4.2 分析天平：感量0.0001 g。
4.3 超声波清洗仪。
4.4 高速离心机。
4.5 精密移液器。
4.6 涡旋振荡器。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
称取样品0.20 g （精确至0.001 g），置5 ml塑料离心管中，加浓度为2 μg/ml的内标溶液50 μl， 涡旋30 s；然后加0.15 ml 0.02 mol/l的醋酸铵水溶液，涡旋30 s，再加2.0 ml乙腈，涡旋60 s后，以10000 rpm转速离心10 min，取上清液，氮气吹干，残渣加2 ml色谱流动相复溶，涡旋60 s，以10000 rpm转速离心5 min，经0.45 μm微孔滤膜过滤后，滤液作为待测液，备用。
5.2 液相色谱-三重串联四极杆质谱联用分析条件
5.2.1 色谱参考条件
色谱柱：waters atlantis t3（3.5 μm， 2.1 × 100 mm）或具有同等柱效的色谱柱；
流动相：甲醇＋0.1%甲酸水溶液 = 1.5＋98.5，恒度洗脱3 min；
流速：0.3 ml/min；
柱温：25 ℃；
进样量：5 μl。
5.2.2 质谱参考条件
离子源： 电喷雾离子源（esi源）；
监测模式： 正离子监测模式； 监测离子对及相关电压参数设定见表2；
雾化气压力： 50 psi；
干燥气流速： 12 l/min；
干燥气温度： 350 ℃；
毛细管电压： 4000 v；
0 - 1 min：不进入质谱仪分析， 1 - 2.5 min：进入质谱仪分析。
5.3 定性判定
用液相色谱-串联质谱法对样品进行定性判定，如果检出的色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且所选择的监测离子对的相对丰度比与标准样品的离子对相对丰度比相一致（见表3），则可以判断样品中存在丙烯酰胺。
5.4 定量测定
在“5.2”项液相色谱-三重四极杆质谱联用分析条件下，用丙烯酰胺加入空白样品的系列浓度的标准溶液（3.12）分别进样，以丙烯酰胺加入空白样品的系列浓度为横坐标，丙烯酰胺与内标的峰面积比为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，其线性相关系数应 > 0.99。取“5.1”项下处理得到的样品待测溶液进样5 μl，将丙烯酰胺与内标的峰面积比代入标准曲线，计算丙烯酰胺的质量浓度，按“6 计算”，计算样品中丙烯酰胺的含量。
5.5 平行实验
按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。
6 计算（略）
7 回收率和精密度
两个浓度水平的平均提取回收率在85 - 110%，并且rsd小于8％（n=6），平均方法回收率在96.6 - 106％之间，并且rsd小于8％（n=6）。
表1 丙烯酰胺系列标准溶液的配制
|
工作溶液 |
溶液初始浓度 |
量取体积 |
定容终体积 |
标准溶液终浓度 |
|
标准溶液1 |
（0.5 mg/ml） |
2 ml |
10 ml |
100 μg/ml |
|
标准溶液2 |
（0.5 mg/ml） |
1 ml |
10 ml |
50 μg/ml |
|
标准溶液3 |
（50 μg/ml） |
1 ml |
10 ml |
5μg/ml |
|
标准溶液4 |
（5μg/ml） |
2 ml |
10ml |
1 μg/ml |
|
标准溶液5 |
（1 μg/ml） |
2 ml |
10 ml |
0.2 μg/ml |
|
标准溶液6 |
（1 μg/ml） |
1 ml |
10 ml |
0.1 μg/ml |
表2 三重四级杆离子对及相关电压参数设定表
|
编号 |
物质名称 |
母离子（m/z） |
frag.（v） |
子离子（m/z） |
ce（v） |
|
1 |
丙烯酰胺 |
72 |
40 |
55 |
8 |
|
2 |
氘代丙烯酰胺（内标） |
75 |
40 |
58 |
8 |
表3 监测离子和离子相对丰度比
|
监测离子对（m/z） |
离子相对丰度比（%） |
允许相对偏差（%） |
|
72-55 |
100 |
|
|
72-44 |
应用标准品测定离子相对丰度比 |
±50 |
|
72-27 |
应用标准品测定离子相对丰度比 |
±50 |
8 色谱图（略）
附件2：
化妆品中甲醛的检测方法
1 范围
本方法规定了采用柱前衍生化液相色谱-紫外检测法测定化妆品中甲醛（cas ：50-00-0）的方法。
本方法适用于化妆品中甲醛含量的测定。
2 方法提要
甲醛测定采用柱前衍生化法，甲醛与2，4-二硝基苯肼反应生成黄色的2，4-二硝基苯腙（见图1），经高效液相色谱分离，紫外检测器在355 nm波长下检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对甲醛的检出限为0.01 µg，定量下限为0.052 µg。取0.2 g样品时，本方法对甲醛的检出浓度为0.001%，最低定量浓度为0.0052%。
图1 甲醛衍生化反应式（略）
3 试剂
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。
3.1 甲醛标准物质水溶液。
3.2 2，4-二硝基苯肼，纯度 ≥ 99.0%。
3.3 三氯甲烷，色谱纯，含量 ≥ 99.9%。
3.4 盐酸（r20 =1.19 g/ml）。
3.5 氢氧化钠。
3.6 磷酸氢二钠（na2hpo4?12h2o）。
3.7 磷酸二氢钠（nah2po4?2h2o）。
3.8 乙腈，色谱纯。
3.9 甲醇，色谱纯。
3.10 去离子水。
3.11 2，4-二硝基苯肼盐酸溶液：称取2，4-二硝基苯肼（3.2） 0.20 g，置于锥形瓶中，先加浓盐酸（3.4）40 ml使溶解，必要时可超声助溶，再加去离子水（3.10）60 ml，摇匀，即得。
3.12 氢氧化钠溶液[c（naoh）= 1 mol/l]：称取naoh（3.5）10 g，加水适量溶解后，转移到250 ml量瓶中，用去离子水（3.10）稀释并定容至刻度，摇匀，即得。
3.13 磷酸缓冲溶液[c（po43-）0.5 mol/l]：精密称定nah2po4?2h2o（3.7）2.28 g和na2hpo4?12h2o（3.6）12.67 g，加水适量溶解后，转移到100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
3.14 乙腈水溶液（9＋1）：量取乙腈（3.8）180 ml，置锥形瓶中，加水20 ml，摇匀，即得。
3.15甲醛系列标准溶液：精密量取适量甲醛标准物质水溶液（3.1）置于10 ml量瓶中，加乙腈水溶液（3.14）稀释至刻度，摇匀，得质量浓度约为1.04 mg/ml的甲醛储备液，然后按照表1进行标准溶液的配制。
表1 甲醛系列标准溶液配制1）
|
工作溶液 |
溶液初始浓度 |
量取体积 |
定容终体积 |
标准工作溶液终浓度 |
|
储备溶液 |
10.4 mg/ml |
1 ml |
10 ml |
1.04 mg/ml |
|
标准溶液1 |
1.04 mg/ml |
2.5 ml |
10 ml |
260 μg/ml |
|
标准溶液2 |
1.04 mg/ml |
2 ml |
10 ml |
208 μg/ml |
|
标准溶液3 |
1.04 mg/ml |
1 ml |
10 ml |
104 μg/ml |
|
标准溶液4 |
104 μg/ml |
5 ml |
10 ml |
52.0 μg/ml |
|
标准溶液5 |
104 μg/ml |
1 ml |
10 ml |
10.4 μg/ml |
|
标准溶液6 |
10.4 μg/ml |
5 ml |
10 ml |
5.2 μg/ml |
注1）：甲醛储备溶液的初始浓度应以甲醛准物质水溶液的标示量计算。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪：具有紫外检测器。
4.2 分析天平：感量0.001 g。
4.3 超声波清洗仪。
4.4 离心机。
4.5 精密吸量管或精密移液器。
4.6 涡旋振荡器。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
称取化妆品样品0.20 g（精确至0.001 g），置具塞刻度管中，加乙腈水溶液（3.14）至2 ml，涡旋2 min，使混匀，以5000 rpm转速离心5 min，精密量取上清液1 ml置5 ml 离心管中，加水2 ml，涡旋30 s，必要时以5000 rpm转速离心5 min，精密量取上清液1 ml置10 ml离心管中，加2，4-二硝基苯肼盐酸溶液（3.11）0.4 ml，涡旋1 min，静置2 min，加磷酸缓冲液（3.13）0.4 ml，再加氢氧化钠溶液（3.12）约1.9 ml调至中性，涡旋10 s，然后加入4 ml 三氯甲烷（3.3），涡旋3 min，以5000 rpm转速离心10 min，取三氯甲烷层溶液1 ml置离心管中，以5000 rpm转速离心10 min，取三氯甲烷层溶液，作为色谱分析待测液，备用。
5.2 色谱参考条件
色谱柱：c18色谱柱（250 × 4.6 mm，5 μm）；
流动相：甲醇＋水（60＋40）；
流速：1.0 ml/min；
柱温：25 ℃；
检测波长：355 nm；
进样体积：10 µl；
运行时间：25 min。
5.3 甲醛标准曲线待测溶液的制备
精密量取5.2 μg/ml、10.4 μg/ml、52 μg/ml、104 μg/ml、208 μg/ml、260 μg/ml系列标准工作溶液各1 ml置5 ml 离心管中，加水2 ml，涡旋30 s，必要时以5000 rpm转速离心5 min，然后精密量取上清液1 ml置10 ml离心管中，加2，4-二硝基苯肼盐酸溶液（3.11）0.4 ml，涡旋1 min，静置2 min，加磷酸缓冲液（3.13）0.4 ml，再加氢氧化钠溶液（3.12）约1.9 ml调至中性，涡旋10 s，然后精密加入4 ml 三氯甲烷（3.3），涡旋3 min，以5000 rpm转速离心10 min，取三氯甲烷层溶液1 ml置离心管中，以5000 rpm转速离心10 min，取三氯甲烷层，作为色谱分析待测液，备用。
5.4 测定
在“5.2”项色谱条件下，取“5.3”项下处理得到的标准曲线待测溶液分别进样，进行液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，甲醛衍生物2，4-二硝基苯腙的峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下处理得到的待测溶液进样10 μl，根据测定的甲醛衍生物2，4-二硝基苯腙的峰面积，代入标准曲线计算游离甲醛的质量浓度。按“7计算”，计算样品中游离甲醛的含量。
6 平行实验
按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
7 计算（略）
8 回收率和精密度
多家实验室验证的平均回收率为99.9% - 104%，相对标准偏差小于7%（n=6）。
9 色谱图（略）
附件3：
化妆品中挥发性有机溶剂的检验方法
1 范围
本方法规定了测定化妆品中15种挥发性有机溶剂的顶空-气相色谱法。
本方法适用于发胶、啫哩水、摩丝、爽肤水、祛痘水、精华露、洗发水、沐浴露、祛斑霜及指甲油等不同基质的化妆品中15种挥发性有机溶剂的含量测定。
本方法所指的15种挥发性有机溶剂为二氯甲烷、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烯、三氯甲烷、1，2-二氯乙烷、苯、三氯乙烯、甲苯、四氯乙烯、乙苯、间、对-二甲苯、苯乙烯、邻-二甲苯和异丙苯。
本方法的检出限和定量下限以3倍空白噪音和10倍空白噪音相对应的量或浓度表示。本方法中各种挥发性有机溶剂的检出限、定量下限及取1g样品时的检出浓度、最低定量浓度见表1。
表1 15种挥发性有机溶剂的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度
|
物质名称 |
检出限（ng） |
定量下限（ng） |
检出浓度（mg/g） |
最低定量浓度（mg/g） |
|
二氯甲烷 |
58 |
200 |
0.58 |
2.0 |
|
1，1-二氯乙烷 |
43 |
150 |
0.43 |
1.5 |
|
1，2-二氯乙烯 |
32 |
110 |
0.32 |
1.1 |
|
三氯甲烷 |
40 |
140 |
0.40 |
1.4 |
|
1，2-二氯乙烷 |
61 |
200 |
0.61 |
2.0 |
|
苯 |
10 |
35 |
0.10 |
3.5 |
|
三氯乙烯 |
31 |
110 |
0.31 |
1.1 |
|
甲苯 |
11 |
40 |
0.11 |
0.4 |
|
四氯乙烯 |
68 |
270 |
0.68 |
2.7 |
|
乙苯 |
9 |
30 |
0.09 |
0.3 |
|
间、对-二甲苯 |
12 |
40 |
0.12 |
0.4 |
|
苯乙烯 |
20 |
70 |
0.20 |
0.7 |
|
邻-二甲苯 |
15 |
50 |
0.15 |
0.5 |
|
异丙苯 |
10 |
35 |
0.10 |
0.35 |
2 原理
样品用水稀释，经顶空处理达到气-液平衡后进样，用具有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分析，以保留时间定性，峰面积外标法定量。
3 试剂
3.1 甲醇，色谱纯。
3.2 氯化钠，分析纯：550℃烘2h～3h。
3.2 15种挥发性有机溶剂标准品：二氯甲烷、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烯、三氯甲烷、1，2-二氯乙烷、苯、三氯乙烯、甲苯、四氯乙烯、乙苯、间、对-二甲苯、苯乙烯、邻-二甲苯、异丙苯（均为色谱纯）。
3.4 15种挥发性有机溶剂标准溶液：分别称取15种挥发性有机溶剂标准品各10mg（精确至0.1mg），分别置于已加少量甲醇的10ml容量瓶中，待溶解完全后用甲醇定容。配成如表2所示浓度的标准储备溶液单标，再取各标准储备溶液单标适量，用水稀释配成混合标准使用溶液和标准系列。
表2 15种挥发性有机溶剂的标准储备溶液浓度及标准系列浓度
|
物质名称 |
储备溶液浓度（mg/l） |
使用溶液浓度（mg/l） |
标准系列浓度（mg/l） | ||||
|
二氯甲烷 |
1000 |
100 |
0.1 |
0.3 |
0.5 |
0.7 |
1.0 |
|
1，1-二氯乙烷 |
100 |
0.1 |
0.3 |
0.5 |
0.7 |
1.0 | |
|
1，2-二氯乙烯 |
100 |
0.1 |
0.3 |
0.5 |
0.7 |
1.0 | |
|
三氯甲烷 |
100 |
0.1 |
0.3 |
0.5 |
0.7 |
1.0 | |
|
1，2-二氯乙烷 |
100 |
0.1 |
0.3 |
0.5 |
0.7 |
1.0 | |
|
苯 |
20 |
0.02 |
0.06 |
0.1 |
0.14 |
0.2 | |
|
三氯乙烯 |
100 |
0.1 |
0.3 |
0.5 |
0.7 |
1.0 | |
|
甲苯 |
1000 |
20 |
0.02 |
0.06 |
0.1 |
0.14 |
0.2 |
|
四氯乙烯 |
100 |
0.1 |
0.3 |
0.5 |
0.7 |
1.0 | |
|
乙苯 |
20 |
0.02 |
0.06 |
0.1 |
0.14 |
0.2 | |
|
间、对-二甲苯 |
20 |
0.02 |
0.06 |
0.1 |
0.14 |
0.2 | |
|
苯乙烯 |
20 |
0.02 |
0.06 |
0.1 |
0.14 |
0.2 | |
|
邻-二甲苯 |
20 |
0.02 |
0.06 |
0.1 |
0.14 |
0.2 | |
|
异丙苯 |
20 |
0.02 |
0.06 |
0.1 |
0.14 |
0.2 |
4 仪器
4.1 气相色谱仪，具氢火焰离子化检测器，分流/不分流进样口，配色谱工作站。
4.2 自动顶空装置，或超级恒温水浴锅（控温精度 0.5℃）和气密针。
4.3 顶空瓶：20ml，配聚四氟乙烯密封盖，带刻度。使用前于120℃烘烤2h～3h。4.4 十万分之一电子天平。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
对于易溶于水的样品，称取样品约1.0g（精确至1mg）于100ml具塞刻度管中，加水至刻度，混匀，此溶液作为待测样液备用；对于难溶于水的样品，直接称取样品约0.1g（精确至1mg）于已加1.0g氯化钠的顶空瓶中，加水至10ml后立即盖上瓶盖轻轻摇匀，作为待测样液。
5.2 测定
5.2.1 色谱及顶空参考条件
色谱柱：db-1，30m×0.32mm i.d.，0.25mm；或选用同等极性的弹性石英毛细管柱。
氮气流速：45.0ml/min；氢气流速：40.0ml/min；空气流速：450ml/min。分流比：10：1。
柱流量：1.0ml/min。
检测器：氢火焰离子化检测器。
温度：进样口温度180℃；检测器温度200℃；柱温35℃（5min），5℃ /min升至120℃，再以30℃ /min升至220℃（5min）。
顶空条件：水浴温度：60℃；平衡时间：30min；进样体积：60μl。
5.2.2 校准曲线的制备
在设定色谱条件下，分别准确吸取挥发性有机溶剂标准系列溶液（3.3）10.0ml于已加1.0g氯化钠的顶空瓶内，立即盖上瓶盖轻轻摇匀，置于60℃水浴平衡30min。取气液平衡后的液上气体60μl注入气相色谱仪进行分析。根据标准系列质量浓度和峰面积，绘制校准曲线。
5.2.3 样品测定
在设定色谱条件下，取待测样液10.0ml于已加1.0g氯化钠的顶空瓶内，立即盖上瓶盖轻轻摇匀，置于60℃水浴中平衡30min。用气密针取待测样品溶液气液平衡后的液上气体60μl注入气相色谱仪，进行分析。色谱图检出的物质，经与该物质的标准质谱图比较确证后，根据峰面积，从校准曲线上查得相应组分的质量浓度。
5.3 空白试验
除不称取样品外，按以上步骤进行。
5.4 平行试验
按以上步骤，做两份样品的平行测定。
6 结果计算
r ´ v
w（挥发性有机溶剂）=----------------------
m
式中：w（挥发性有机溶剂）-- 样品中挥发性有机溶剂的质量分数，mg/g；
r -- 从校准曲线上查得的测试溶液中挥发性有机溶剂的质量浓度，mg/l；
v -- 样品定容体积，ml；
m -- 样品取样量，g。
7 色谱图（略）
8 阳性结果的确认
对于测定过程中有阳性结果的样品，建议用气相色谱-质谱法确认。
8.1 气相色谱-质谱参考条件
色谱柱：db-1，30m×0.32mm i.d.，0.25mm；或选用同等极性的弹性石英毛细管柱。
柱温：初始温度35℃，保留5min，然后以5℃ /min的速度升至120℃，再以30℃/min的速度升至220℃，保留5min；
进样口温度180℃，离子源温度230℃，接口温度230℃，分流比：10：1，柱流量：1.5ml/min，恒流模式，选择离子检测。
8.2 质谱参考特征离子
表3 15种挥发性有机溶剂的质谱参考特征离子
|
物质名称 |
特征离子（m/z） |
|
二氯甲烷 |
49，84，86 |
|
1，1-二氯乙烷 |
63，65，83 |
|
1，2-二氯乙烯 |
61，96，98 |
|
三氯甲烷 |
83，85，87 |
|
1，2-二氯乙烷 |
49，62，98 |
|
苯 |
77，78 |
|
三氯乙烯 |
95，130，132 |
|
甲苯 |
65，91，92 |
|
四氯乙烯 |
166，164，129，131 |
|
乙苯 |
91，106 |
|
间、对-二甲苯 |
77，96，106 |
|
苯乙烯 |
78，103，104 |
|
邻-二甲苯 |
77，96，106 |
|
异丙苯 |
77，105，120 |
9 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的10%。
附件4：
化妆品中钕等15种稀土元素的检测方法
1 范围
本标准规定了测定化妆品中钕 （nd）、镧（la）、铈（ce）、镨 （pr ）、镝（dy ）、铒 （er）、铕 （eu ）、钆 （gd ）、钬 （ho ）、镥 （lu ）、钐（sm ）、铽（tb）、铥（tm ）、钇（y）、镱（yb）15种稀土元素的电感耦合等离子体质谱法。
本方法适用于化妆品中钕等稀土元素的测定。
2 原理
样品微波消解处理成溶液后，经气动雾化器以气溶胶的形式进入氩气为基质的高温射频等离子体中，经过蒸发、解离、原子化、电离等过程，转化为带正电荷的正离子，经离子采集系统进入质谱仪，质谱仪根据质荷比进行分离，质谱积分面积与进入质谱仪中的离子数成正比。即被测元素浓度与各元素产生的信号强度cps成正比，与标准系列比较定量。
若取0.5g样品，本方法定量下限（mg/l）和最低定量浓度（mg/kg）分别为： la ，0.05、2.5；ce，0.05、2.5；pr，0.04、2.0；nd，0.09、4.5；sm，0.07、3.5；eu，0.03、1.5；gd，0.13、6.5；tb，0.14、7.0；dy，0.05、2.5；ho，0.07、3.5；er， 0.07、3.5；tm，0.04、2.0；yb，0.07、3.5；lu，0.08、4.0；y，0.10、5.0。
3 试剂
3.1 超纯水：18.2mωcm。
3.2 硝酸（5＋95）：量取优级纯硝酸（ρ20=1.42g/ml）5 ml，加入95 ml超纯水（3.1）中。
3.3 过氧化氢：[w（h2o2）= 30%]。
3.4 混合标准储备液： la、ce、pr 、nd、dy、er、eu 、gd 、ho 、lu 、sm 、tb、tm 、y、yb [ρ=10.0mg/l]。选用相应浓度的持证混合标准溶液。
3.5混合标准使用液： 准确移取混合标准储备液[ρ=10.0mg/l]10 ml，用硝酸（5＋95）（3.2）定容至100 ml，摇匀，配成质量浓度为1000µg/l的混合标准使用液。
3.6内标储备溶液： re [ρ=10.0mg/l]、rh [ρ=10.0mg/l]。选用相应浓度的持证混合标准溶液。
3.7内标使用液： 用硝酸（5＋95）（3.2）配成浓度为1 mg/l的（re＋rh）混合内标使用溶液。[注1]
3.8质谱调谐液： 锂（li）、钇（y）、铈（ce）、铊（tl）、钴（co）混合溶液为质谱调谐液，浓度为10μg/l。[注2]
4 仪器：
4.1 电感耦合等离子体质谱（icp-ms），微机工作站。
4.2 微波消解仪，高压微波消解罐。
4.3 水浴锅（或敞开式电加热恒温炉）。
4.4 天平：感量0.001g。
5 分析步骤
5. 1 样品预处理：
准确称取样品约0.5g（粉状样品可称取0.3g左右），精确至0.01g，置于清洗好的聚四氟乙烯微波内罐中。含乙醇等挥发性原料的样品如香水、摩丝、沐浴液、染发剂、精华素、刮胡水、面膜等，则先放入温度可调的100ºc水浴锅或电加热恒温炉上挥发（不得蒸干）。油脂类和膏粉类等干性物质，如唇膏、睫毛膏、眉笔、胭脂、唇线笔、粉饼、眼影、爽身粉、痱子粉等，取样后先加水0.5ml～1.0ml，润湿。上述有些样品必要时加硝酸预消化。
加入浓硝酸6ml，30%过氧化氢2ml，在最佳条件下进行微波消解。冷却至室温，将消解好的含样品的微波内罐放入温度可调的100ºc水浴锅或电加热恒温炉加热数分钟（不得蒸干），驱除样品中多余的氮氧化物，以免干扰测定。用超纯水定容至25ml容量瓶中，于聚乙烯管中保存，待测。对于某些粉质化妆品消解后存在一些沉淀物或悬浊物，定容后过滤，待测。图1为微波消解参考条件。[注3]
图1 微波消解程序升温条件（略）
5.2 测定
5.2.1仪器参考条件
用调协液调整仪器各项指标，使仪器灵敏度、氧化物、双电荷、分辨率等指标达到要求。仪器参考条件：射频功率：1300w；载气流速：1.14l/min；采样深度：6.8mm；雾化器：barbinton；雾化室温度：2℃；采样锥与截取锥类型：镍锥；冷却水流速：1.70 l/min。[注4]
5.2.2校准曲线的制备
分别准确移取混合标准使用液（3.5）0.00ml、0.05ml、0.10ml、0.50ml、1.00ml、2.00ml、5.00ml、10.0ml于100ml容量瓶中，加硝酸（5＋95）溶液（3.2）至刻度，摇匀。此时溶液中稀土元素浓度分别为0.00、0.50、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100μg /l。根据待测元素的实际含量，可在0.50μg /l～100μg /l范围内选取合适的校准曲线范围。
5.2.3样品测定
在仪器最佳条件下，引入在线内标溶液（3.7），标准和样品同时进行icp-ms分析。每一样品定量需三次积分，取平均值。以校准曲线质量浓度为横坐标，计数值（cps）为纵坐标，绘制校准曲线，由工作站直接计算出待测溶液的浓度。
对每一元素，应测定可能影响数据的每一同位素（见表2），以减少干扰造成的分析误差。
表2 每一元素应同时测定的同位素
|
元素 |
质量数 |
元素 |
质量数 |
元素 |
质量数 |
|
la |
139 |
eu |
151 153 |
er |
166 167 |
|
ce |
140 |
gd |
155 157 |
tm |
169 |
|
pr |
141 |
tb |
159 |
yb |
171 172 173 |
|
nd |
143 145 146 |
dy |
161 163 |
lu |
175 |
|
sm |
147 149 |
ho |
165 |
y |
89 |
注：下划线元素为方法推荐的用于定量的同位素质量数
5.3空白试验
除不称取样品外，按以上步骤进行。
5.4平行试验
按以上步骤，做两份样品的平行测定。
6 结果计算
（r1-r0）* v
w（稀土元素）= ----------------------------------------
m * 1000
式中： w（稀土元素）--样品中稀土元素的质量分数，μg/g；
r1 --测试液中稀土元素的质量浓度，ng/ml；
r0 --空白溶液中稀土元素的质量浓度，ng/ml；
v --样品消化液总体积，ml；
m --样品质量，g。
7 精密度和准确度
根据不同物理形态样品中15种稀土元素的含量不同，在水、膏、霜状样品中加入质量浓度为0.5μg/l和 10μg/l混合稀土标准溶液，在粉状样品中加入质量浓度为5μg/l和 10μg/l混合稀土标准溶液。低浓度的rsd（%）在1.45%～7.71%之间，中浓度的rsd（%）在1.63%～7.93%之间，高浓度的rsd（%）在1.61%～5.81%之间。低浓度加标回收率在89.3%～114. 6%之间，、中浓度加标回收率在97.2%～111. 0%之间，高浓度加标回收率在98.0%～109. 3%之间。
8 方法注释
注1：根据在线内标管与样品管的内径比，实际样品中加入内标液浓度为50μg /l（re＋rh）。
注2：可根据不同型号仪器选用合适的质谱调谐液。
注3：可根据不同型号微波消解仪器的特点选择适量的消解液及最佳消解条件进行样品消解。
注4：根据仪器型号的不同，选择适合的仪器最佳测定条件。
附件5：
化妆品中邻苯二甲酸酯类化合物的检测方法
1 范围
本方法规定了测定香水、发胶、指甲油等化妆品中10种邻苯二甲酸酯类化合物的高效液相色谱法。
本方法适用于香水、发胶、指甲油等化妆品中10种邻苯二甲酸酯类化合物的含量测定。
本方法所指的10种邻苯二甲酸酯类化合物包括邻苯二甲酸二甲酯（dmp）、邻苯二甲酸二乙酯 （dep）、邻苯二甲酸二正丙酯（dpp）、邻苯二甲酸二正丁酯（dbp）、邻苯二甲酸二正戊酯（dap）、邻苯二甲酸二正己酯（dhp）、邻苯二甲酸丁基苄酯（bbp）、邻苯二甲酸二环己酯（dchp）、邻苯二甲酸二正辛酯（dop）和邻苯二甲酸二异辛酯（dehp）。
本方法中各种邻苯二甲酸酯类化合物的检出限及取1g样品时的检出浓度见表1。
表1 各种邻苯二甲酸酯类化合物的检出限和检出浓度
|
物质名称 |
dmp |
dep |
dpp |
bbp |
dbp |
dap |
dchp |
dhp |
dehp |
dop |
|
检出限 / ng |
0. 5 |
0. 5 |
3 |
3 |
3 |
40 |
40 |
40 |
5 |
5 |
|
定量下限 / ng |
2 |
2 |
10 |
10 |
10 |
135 |
135 |
135 |
20 |
20 |
|
检出浓度 /（mg/g） |
1 |
1 |
5 |
5 |
5 |
70 |
70 |
70 |
10 |
10 |
|
最低定量浓度 /（mg/g） |
4 |
4 |
20 |
20 |
20 |
270 |
270 |
270 |
40 |
40 |
2 原理
邻苯二甲酸酯类化合物在280nm处有特征紫外吸收，可用反相高效液相色谱（hplc）分离，并根据保留时间和紫外光谱图定性，峰面积定量。
3 试剂
3.1 甲醇，色谱纯。（溶剂应不含邻苯二甲酸酯类化合物）
3.2 邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二正丙酯、邻苯二甲酸丁基苄酯、邻苯二甲酸二正丁酯、邻苯二甲酸二正戊酯、邻苯二甲酸二环己酯、邻苯二甲酸二正己酯、邻苯二甲酸二异辛酯、邻苯二甲酸二正辛酯（纯度>97.5%）。
3.3 混合标准储备溶液（r=1 000mg/l）：分别称取10种邻苯二甲酸酯类化合物标准品0.05g（精确到0.1mg），用甲醇（3.1）溶解，移入50 ml容量瓶中，定容，摇匀，配成质量浓度为1 000mg/l的混合标准溶液。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器，配色谱工作站。
4.2 微量进样器或自动进样装置。
4.3 超声波清洗器。
4.4 高速离心机。
4.5 电子天平。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
称取样品约1g（精确至1mg）于10ml具塞刻度管中，加入甲醇（3.1）至刻度，振摇，超声提取20min，必要时可高速离心。经0.45mm滤膜过滤，滤液作为待测样液备用。
5.2 测定
5.2.1 色谱参考条件
5.2.1.1 色谱柱：c18 柱，250mm×4.6mm，5mm。
5.2.1.2 流动相：a相：甲醇，b相：水，梯度洗脱，洗脱程序见表2。
5.2.1.3 流速：1.0ml/min。
5.2.1.4 检测器：二极管阵列检测器，检测波长为280nm。
5.2.1.5 柱温：25℃或室温（无温控装置时适用）。
表2 流动相甲醇和水梯度洗脱程序（体积比）
|
时间 / min |
0 |
12 |
15 |
22 |
23 |
25 |
|
甲醇＋水 |
75＋25 |
75＋25 |
100＋0 |
100＋0 |
75＋25 |
75＋25 |
5.2.2 校准曲线的制备
移取邻苯二甲酸酯类化合物标准储备溶液（3.3）0ml、1.00ml、2.00ml、4.00ml、6.00ml、8.00ml于10ml具塞刻度管中，用甲醇（3.1）稀释至刻度，摇匀。此时溶液中各组分浓度分别为0 mg/l、100 mg/l、200 mg/l、400 mg/l、600 mg/l和800 mg/l。在设定色谱条件下，分别取5ml进行hplc分析。根据标准系列质量浓度和峰面积，绘制校准曲线。
5.2.3 样品测定
在设定色谱条件下，进5ml待测样液进行高效液相色谱分析。若样品中待测组分含量过高，应用甲醇稀释后测定。色谱图检出的物质，经与该物质的标准紫外光谱图比较确证后，根据峰面积，从校准曲线上查得相应组分的质量浓度。
5.3 空白试验
除不称取样品外，按以上步骤进行。
5.4 平行试验
按以上步骤，做两份样品的平行测定。
6 结果计算
r ´ v
w（邻苯二甲酸酯）= --------------------------
m
式中：w（邻苯二甲酸酯）--化妆品中邻苯二甲酸酯的质量分数，mg/g；
r --从校准曲线上查得的待测样液中邻苯二甲酸酯的质量浓度，mg/l；
v --样品定容体积，ml；
m --样品用量，g。
7 色谱图（略）
8 阳性结果的确认
测定过程中如果有阳性结果，可采用气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法等进一步确证。
气相色谱参考条件：
色谱柱：hp-5ms或类似石英毛细管柱（30m×0.25mm i.d.，0.25mm）；进样口温度：250℃；色谱与质谱接口温度：280℃；柱温：程序升温，初始温度60℃（1min），以20℃/min上升至220℃（1min），再以5℃/min上升至280℃（4min）；载气：高纯氦气，流速1.0ml/min；进样方式：不分流进样，进样量：1.0ml。
质谱参考条件：
电离方式：电子轰击（ei）源；电离能量：70ev；溶剂延迟：5min；扫描方式：选择离子扫描（sim）
9 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的10%。
附录 邻苯二甲酸酯类化合物的信息表
|
序号 |
中文名称 |
英文名称 |
cas no. |
英文缩写 |
化妆品禁用组分 |
纳入《国际化妆品原料标准中文名称目录》 |
|
1 |
邻苯二甲酸二甲酯 |
dimethyl phthalate |
131-11-3 |
dmp |
/ |
《国际化妆品原料标准中文名称目录》3345号 |
|
2 |
邻苯二甲酸二乙酯 |
diethyl phthalate |
84-66-2 |
dep |
/ |
《国际化妆品原料标准中文名称目录》3084号 |
|
3 |
邻苯二甲酸二正丙酯 |
dipropyl phthalate |
131-16-8 |
dpp |
/ |
/ |
|
4 |
邻苯二甲酸二正丁酯 |
dibutyl phthalate |
84-74-2 |
dbp |
《化妆品卫生规范》（2007年版） 表2（1） 411号 |
《国际化妆品原料标准中文名称目录》2985号 |
|
5 |
邻苯二甲酸二正戊酯 |
diamyl phthalate |
131-18-0 |
dap |
《化妆品卫生规范》（2007年版） 表2（1） 15号 |
/ |
|
6 |
邻苯二甲酸二正己酯 |
dihexyl phthalate |
84-75-3 |
dhp |
/ |
/ |
|
7 |
邻苯二甲酸丁基苄酯 |
benzyl butyl phthalate |
85-68-7 |
bbp |
《化妆品卫生规范》（2007年版） 表2（1） 281号 |
《国际化妆品原料标准中文名称目录》1265号 |
|
8 |
邻苯二甲酸二环己酯 |
dicyclohexyl phthalate |
84-61-7 |
dchp |
/ |
/ |
|
9 |
邻苯二甲酸双（1-辛基）酯 |
bis（1-octyl）phthalate |
117-84-0 |
dop |
/ |
/ |
|
10 |
邻苯二甲酸双（2-乙基己基）酯 |
bis（2-ethylhexyl）phthalate |
117-81-7 |
dehp |
《化妆品卫生规范》（2007年版） 表2（1） 289号 |
《国际化妆品原料标准中文名称目录》3076号 |
附件6：
化妆品中三氯卡班的检测方法
1 范围
本方法规定了采用液相色谱法测定化妆品中三氯卡班（cas：101-20-2）含量的方法。
本方法适用于固体皂类、水类、乳液类等化妆品中三氯卡班含量的测定。
2 方法提要
样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对三氯卡班的检出限为0.0005 μg，定量下限为0.001 mg；若取样品0.25 g，本方法对三氯卡班的检出浓度为4.5 mg/g，最低定量浓度为7.5 mg/g。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。
3.1 三氯卡班，纯度>99.0%。
3.2 丙酮，色谱纯。
3.3 甲醇，色谱纯。
3.4 三氯卡班标准储备液（ρ = 0.5 g/l）：精密称取三氯卡班0.025 g（精确到0.0001 g）于50 ml容量瓶中，加入甲醇（3.3）溶解并定容至50 ml，即得质量浓度为0.5 mg/ml的三氯卡班标准储备溶液。
3.5 系列浓度三氯卡班标准溶液：按照表1操作，分别精密量取一定体积的三氯卡班标准储备溶液（3.4）和标准溶液于10 ml容量瓶中，以甲醇（3.3）稀释并定容至刻度，得系列浓度三氯卡班的标准溶液。
表1 三氯卡班系列标准溶液的配制
|
序号 |
工作溶液 |
标准溶液的浓度 |
量取体积 |
定容体积 |
标准溶液终浓度 |
|
1 |
储备液 |
0.5 mg/ml |
2.4 ml |
10 ml |
120 μg/ml |
|
2 |
储备液 |
0.5 mg/ml |
2 ml |
10 ml |
100 μg/ml |
|
3 |
标准溶液 |
100 μg/ml |
2 ml |
10 ml |
20 μg/ml |
|
4 |
标准溶液 |
20 μg/ml |
2.5 ml |
10 ml |
5 μg/ml |
|
5 |
标准溶液 |
5 μg/ml |
2 ml |
10 ml |
1 μg/ml |
4 仪器
4.1高效液相色谱仪：具有紫外检测器。
4.2分析天平：感量0.0001g。
4.3超声波清洗器。
4.4微型涡旋振荡器。
5 测定步骤
5.1 样品处理
5.1.1 固体皂类化妆品
从中部切开样品，刮取断面样品（碎末状），准确称取0.25g，精确至0.001g，置于25 ml具塞比色管中，加入丙酮（3.2）5 ml，涡旋60s，分散均匀，超声（功率：400w）分散15 min，再加入甲醇（3.3）15 ml，超声（功率：400w）提取15 min，冷却到室温后，用甲醇（3.3）定容至25 ml刻度线，涡旋振荡摇匀，混液过0.45 mm滤膜，滤液可根据需要进行稀释，保存于2 ml棕色进样瓶中作为待测样液，备用。
5.1.2乳液和水类化妆品
准确称取试样0.25g，精确至0.001g，置于25 ml具塞比色管中，加入甲醇（3.3）20 ml，涡旋60s，分散均匀，超声（功率：400w）提取15 min，冷却到室温后，用甲醇（3.3）定容至25 ml刻度线，涡旋振荡摇匀，混液过0.45 mm滤膜，滤液可根据需要进行稀释，保存于2 ml棕色进样瓶中作为待测样液，备用。
5.2 色谱条件
色谱柱：c18 柱，250 mm×4.6mm i.d.，5 mm，或等效色谱柱；
流动相：甲醇 ＋ 水（88 ＋ 12）；
流速：1.0 ml/min；
检测波长：281 nm；
柱温：25 ℃；
进样量：20 ml。
5.3 测定
在5.2色谱条件下，取系列浓度的标准溶液（3.5）分别进样，进行色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下处理得到的待测溶液进样20 μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算三氯卡班的质量浓度。按“6计算”，计算样品中三氯卡班的含量。
5.4 平行实验
按以上步骤操作，对同一样品独立进行平行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
6 计算（略）
7 回收率和精密度
多家实验室验证的平均回收率为91～106%，相对标准偏差小于3%。
8 色谱图（略）
附件7：
化妆品中苯氧异丙醇的检测方法
1 范围
本方法规定了采用液相色谱法测定化妆品中苯氧异丙醇（cas：770-35-4）含量的方法。
本方法适用于淋洗类化妆品（包括乳液和水类，不包括口腔卫生用品）中苯氧异丙醇含量的测定。
2 方法提要
样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，主峰峰面积定量（杂质峰的分离度r>1.5），以标准曲线法计算含量。本方法对苯氧异丙醇的检出限为0.0008 μg，定量下限为0.0012 mg；若取样品0.25 g，本方法对苯氧异丙醇的检出浓度为5.0 mg/g，最低定量浓度为8.0 mg/g。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。
3.1苯氧异丙醇，纯度>93.0%。
3.2 乙腈，色谱纯。
3.3 甲醇，色谱纯。
3.4 四氢呋喃（thf），色谱纯。
3.5 流动相溶剂，水＋乙腈＋甲醇＋thf（60 ＋ 25 ＋ 10 ＋ 5）。
3.6 苯氧异丙醇标准储备液（ρ = 1.0 g/l，质量浓度根据纯度折算）：精密称取苯氧异丙醇，精确到0.0001 g，于50 ml容量瓶中，加入甲醇（3.3）溶解并定容至50 ml，配制得质量浓度为1.0 mg/ml的苯氧异丙醇标准储备溶液。
3.7 系列浓度苯氧异丙醇标准溶液：按照表1操作，分别精密量取一定体积的苯氧异丙醇标准储备溶液（3.6）和标准溶液于10 ml容量瓶中，以甲醇（3.3）稀释并定容至刻度，得系列浓度苯氧异丙醇的标准溶液。
表1 苯氧异丙醇系列标准溶液的配制
|
序号 |
工作溶液 |
标准溶液的浓度 |
量取体积 |
定容体积 |
标准溶液终浓度 |
|
1 |
储备液 |
1.0 mg/ml |
2 ml |
10 ml |
200 μg/ml |
|
2 |
储备液 |
1.0 mg/ml |
1 ml |
10 ml |
100 μg/ml |
|
3 |
储备液 |
1.0 mg/ml |
0.5 ml |
10 ml |
50 μg/ml |
|
4 |
标准溶液 |
50 μg/ml |
2 ml |
10 ml |
10 μg/ml |
|
5 |
标准溶液 |
10 μg/ml |
1 ml |
10 ml |
1 μg/ml |
4 仪器
4.1高效液相色谱仪：具有紫外检测器。
4.2分析天平：感量0.0001g。
4.3超声波清洗器。
4.4微型涡旋振荡器。
5 测定步骤
5.1 样品处理
准确称取试样0.25g，精确至0.001g，置于25 ml具塞比色管中，加入甲醇（3.3）20 ml，涡旋60s分散均匀，超声（功率：400w）提取15 min，冷却到室温后，用流动相溶剂（3.5）定容至25 ml刻度线，涡旋振荡摇匀，混液过0.45 mm滤膜，滤液可根据需要进行稀释，保存于2 ml棕色进样瓶中作为待测样液，备用。
5.2 色谱条件
色谱柱：c18 柱，250 mm×4.6mm i.d.，5 mm，或等效色谱柱；
流动相：水＋乙腈＋甲醇＋thf（60 ＋ 25 ＋ 10 ＋ 5）；
流速：1.2 ml/min；
检测波长：268 nm；
柱温：30 ℃；
进样量：20 ml。
5.3 测定
在5.2色谱条件下，取系列浓度的标准溶液（3.7）分别进样，进行色谱分析，以主峰定量，杂质峰的分离度r>1.5；以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取5.1项下处理得到的待测溶液进样20 μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算苯氧异丙醇的质量浓度。按6计算样品中苯氧异丙醇的含量。
5.4 平行实验
按以上步骤操作，对同一样品独立进行平行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
6 计算（略）
7 回收率和精密度
多家实验室验证的平均回收率为96～107%，相对标准偏差小于3%。
8 色谱图（略）
附件8：
化妆品中奎宁的检测方法
1 范围
本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中奎宁（cas：130-95-0）含量的方法。
本方法适用于淋洗型香波、驻留型护发类化妆品中奎宁含量的测定。
2 方法提要
试样采用甲醇超声提取，上清液经滤膜过滤用液相色谱分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对奎宁的检出限为0.00156mg，定量下限为0.005 mg。若取0.25g样品，本方法对奎宁的检出浓度为16.7ug/g，最低定量浓度为56ug/g。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。
1.1甲醇，色谱纯。
1.2磷酸氢二铵，色谱纯。
1.3奎宁，纯度≥98%。
3.4奎宁标准储备液：取奎宁约 0.0500g，精确到0.0001g，置50 ml棕色容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容至刻度，摇匀，配成质量浓度为1.0 g/l的标准储备溶液。
3.5奎宁标准工作溶液：精密配制浓度分别为1.0 mg/ml、10.0 mg/ml、30.0 mg/ml、80.0 mg/ml、120.0 mg/ml和200.0 mg/ml的系列奎宁标准工作溶液。
4 仪器
4.1高效液相色谱仪：具有紫外检测器。
4.2微型涡旋混合仪。
4.3超声波清洗器。
4.4分析天平：感量0.0001g。
4.5微量进样器，50ml或100ml。
5 测定步骤
5.1 样品前处理
准确称取混匀的试样约0.250g，精确至0.001g，置于25ml具塞刻度管中，加入20 ml甲醇（3.1），涡旋1 min，振摇，超声（功率：400w）提取30 min，取出后冷却至室温，用甲醇（3.1）定容至25 ml刻度线，涡旋振荡摇匀，取上层液经0.45 mm滤膜过滤，滤液作为待测样液，备用。
5.2测定
5.2.1色谱条件
色谱柱：c18 柱，250 mm×4.6mm，5 mm；
流动相：甲醇＋0.01mol/l（nh4）2hpo4（90＋10）；
流速：1.0 ml/min；
检测波长：328 nm；
柱温：30℃；
进样量：20ml。
5.2.2 测定方法
取标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标进行线性回归，建立标准工作曲线。取“5.1”项下处理得到的待测溶液进样，根据测定成分的峰面积，代入标准工作曲线上得出奎宁的质量浓度。按“6计算”，计算试样中奎宁的含量。
5.3 平行实验
按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
6 计算（略）
7 精密度与准确度
多家实验室验证的回收率为90～115%，相对标准偏差小于7%。
8 色谱图（略）
附件9：
化妆品中6-甲基香豆素的检测方法
高效液相色谱法
1 范围
本方法规定了用高效液相色谱法测定化妆品中6-甲基香豆素的含量。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中6-甲基香豆素的测定。
暂无实验数据表明本方式适用于蜡质类化妆品中6-甲基香豆素含量的测定。
2 方法提要
样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。必要时，采用气相色谱-质谱（gc/ms）进行确证。本方法对6-甲基香豆素的检出限为0.00005µg，定量下限为0.00017µg。若取1g样品，本方法对6-甲基香豆素的检出浓度为0.000005%，最低定量浓度为0.000017%。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。
3.1 甲醇：色谱纯。
3.2 6-甲基香豆素，纯度≥99.0%。
3.3 磷酸二氢钠
3.4 磷酸二氢钠缓冲溶液[c（nah2po4）=0.02mol/l，ph =3.5）：称取3.12g磷酸二氢钠，加水溶解并稀释至1000ml，磷酸调ph值至3.5。
3.5 6-甲基香豆素标准储备溶液[ （6-甲基香豆素）=1.0g/l）]：精密称取6-甲基香豆素0.1000g于100 ml容量瓶中，加甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度，即得标准储备溶液（浓度为1g/l）。
3.6 系列浓度6-甲基香豆素标准溶液：精密量取标准储备溶液（3.5）5ml置于50ml量瓶中，即得100μg/ ml的标准溶液，再分别精密量取0.1 ml，0.5 ml，1.0 ml，3.0 ml，5.0 ml，10 ml于100ml的量瓶中，加甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度。即得浓度分别为0.1μg/ ml、0.5μg/ ml、1.0μg/ ml、3.0μg/ ml、5.0μg/ ml、10.0μg/ ml的标准溶液。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪：具紫外检测器。
4.2 气相色谱-质谱仪。
4.3 分析天平：感量为0.01g。
4.4 分析天平：感量为0.00001g。
4.5 容量瓶：10ml、100ml。
4.6 具塞刻度离心试管：10ml。
4.7 涡旋振荡器。
4.8 超声波清洗仪。
4.9 离心机：转速不小于5000r/min。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取1.0g（精确至0.01g）样品于10ml容量瓶中，加入5ml甲醇（3.1），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20min，冷却至室温后，用甲醇（3.1）稀释至刻度，混匀后转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为样品溶液备用。若样品中6-甲基香豆素的浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2 色谱条件
a）色谱柱：c18柱（ 250mm×4.6mm，5μm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂）；
b）流动相：甲醇-磷酸二氢钠缓冲溶液（3.4）；
梯度洗脱参考条件见下表：
|
时间（min） |
甲醇（%） |
磷酸二氢钠缓冲溶液（%） |
|
0 |
55 |
45 |
|
11 |
55 |
45 |
|
12 |
90 |
10 |
|
40 |
90 |
10 |
|
41 |
55 |
45 |
|
50 |
55 |
45 |
注：梯度洗脱条件，操作者可根据样品的不同选择最佳条件，使6-甲基香豆素与其他组分峰获得完全分离。
c） 流速：1ml/min；
d） 检测波长：275nm；
e） 柱温：35℃；
f）进样量：10µl。
5.3 测定
按“5.2”项下色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.6）分别进样，进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1” 项下样品溶液进样10μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算6-甲基香豆素的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中6-甲基香豆素的含量。
6-甲基香豆素标准溶液高效液相色谱图参见附录a的图a.1。
5.4 阳性结果确证
必要时，采用气相色谱-质谱确证阳性检测结果，以检查化妆品中是否有其它物质干扰6-甲基香豆素的测定。如果检出的色谱峰的保留时间与标准品一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且所选择的离子的相对丰度比与标准物质相一致，则可判断样品中存在6-甲基香豆素。
气相色谱-质谱（gc/ms）参考条件：
a）色谱柱：hp-5ms 毛细管柱（30m×0.32mm×0.25µm，5%-苯基-甲基聚硅氧烷）或相当者；
b）柱温程序：初始温度100℃，保持3min，后以8℃/min 的速率升至 200℃，保持 3min；
c）进样口温度：250℃；
d） 接口温度：280℃；
e）载气：氦气1.0 ml/min；
f）电离方式：ei；
g）电离能量：70ev；
h）监测方式：全扫描；
i）监视离子范围（m/z）：40～200；
j） 进样方式：不分流进样；
k） 进样量：1.0µl。
6-甲基香豆素的全扫描图参见附录c的图c.1；质谱图参见附录c的图c.2。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.001%～0.005%范围内，测定结果的平均回收率在92.2%～103.5%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
气相色谱法
1 范围
本方法规定了用气相色谱法测定化妆品中6-甲基香豆素的含量。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中6-甲基香豆素的测定。
暂无实验数据表明本方式适用于蜡质类化妆品中6-甲基香豆素含量的测定。
2 方法提要
样品在经过提取后，经气相色谱仪分离，氢火焰离子化检测器（fid）检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。必要时，采用气相色谱-质谱（gc/ms）进行确证。本方法对6-甲基香豆素的检出限为0.00013µg，定量下限为0.0005µg。若取1g样品，本方法对6-甲基香豆素的检出浓度为0.00013%，最低定量浓度为0.0005%。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯。
3.1 甲醇：色谱纯。
3.2 无水硫酸钠：于650℃灼烧4h，储于密闭干燥器中备用。
3.3 6-甲基香豆素：纯度≥99.0%。
3.4 6-甲基香豆素标准储备溶液[ （6-甲基香豆素）=1.0g/l）]：精密称取6-甲基香豆素0.1000g于100 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得标准储备溶液（浓度为1g/l）。
3.5 系列浓度6-甲基香豆素标准溶液：精密量取标准储备溶液（3.5）5ml置于50ml量瓶中，即得100μg/ ml的标准溶液，再分别精密量取0.5 ml，1.0 ml，3.0 ml，5.0 ml，10 ml于100ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。即得浓度分别为0.5μg/ ml、1.0μg/ ml、3.0μg/ ml、5.0μg/ ml、10.0μg/ ml的标准溶液。
4 仪器
4.1 气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器（fid）。
4.2 分析天平：感量为0.01g。
4.3 分析天平：感量为0.00001g。
4.4 容量瓶：10ml、100ml。
4.5 具塞刻度离心试管：10ml。
4.6 涡旋振荡器。
4.7 超声波清洗仪。
4.8 离心机：转速不小于5000r/min。
4.9 注射式样品过滤器（有机溶媒型，0.45μm）。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取1.0g（精确至0.01g）样品于10ml容量瓶中，加入5ml甲醇（3.1），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20min，冷却放置室温，用甲醇（3.1）稀释至刻度，混匀后转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经3g无水硫酸钠（3.2）脱水，经0.45μm滤膜过滤，滤液作为样品溶液备用。若样品中6-甲基香豆素的浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2 色谱条件
a）色谱柱：hp-5 毛细管柱（30m×0.32mm×0.25µm，5%-苯基-甲基聚硅氧烷）或相当者；
b） 柱温程序：初始温度100℃，保持3min，后以8℃/min 的速率升至 200℃，保持 3min；
c） 进样口温度：250℃；
d） 检测器温度：280℃；
e） 载气：氮气1.0 ml/min（纯度为99.999%）；
f） 燃气：氢气30 ml/min；
g） 助燃气：空气400 ml/min；
h） 尾吹n2流量：30 ml/min；
i） 进样方式：不分流进样；
j） 进样量：1.0µl。
注：载气、空气、氢气流速随仪器而异，操作者可根据仪器及色谱柱等差异，通过试验选择最佳操作条件，使6-甲基香豆素与其他组分峰获得完全分离。
5.3 测定
按“5.2.1”项下色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.5）分别进样，进行气相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1” 项下样品溶液进样1.0μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算6-甲基香豆素的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中6-甲基香豆素的含量。必要时用第一法佐证。
6-甲基香豆素标准溶液气相色谱图参见附录a的图a.1。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.001%～0.005%范围内，测定结果的平均回收率在96.3%～103.5%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
附录a （资料性附录）液相色谱图示例（略）
附录b （资料性附录）气相色谱图示例（略）
附录c （资料性附录）gc/ms示例（略）
图c.1 6-甲基香豆素标准溶液的gc/ms全扫描图（略）
图c.2 6-甲基香豆素标准溶液的gc/ms质谱图（略）
表c.1 6-甲基香豆素特征离子表
|
名称 |
分子式 |
cas编号 |
特征选择离子及丰度比 |
|
6-甲基香豆素 |
c10h8o2 |
92-48-8 |
160（100），132（74），131（51） |
附件10：
化妆品中苯甲醇的检测方法
气相色谱法
1 范围
本方法规定了采用气相色谱法测定化妆品中防腐剂苯甲醇（cas：100-51-6）含量的方法。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中苯甲醇含量的测定。
暂无实验数据表明本方法适用于蜡质类化妆品中苯甲醇含量的测定。
2 方法提要
样品经过提取后，采用气相色谱仪分离，氢火焰离子化检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法的检出限为0.0012μg，定量下限为0.0039μg。若取1.0g样品，本方法对苯甲醇的检出浓度为0.0012%，最低定量浓度为0.004%。
必要时，采用气相色谱-质谱（gc/ms）确证。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯。
3.1 无水乙醇。
3.2 苯甲醇，纯度≥99.5%。
3.3 苯甲醇标准储备液［ （苯甲醇）=1.0g/l］：精密称取苯甲醇标准品0.1000g于100ml的容量瓶中，用无水乙醇（3.1）溶解并稀释至刻度。即得质量浓度为1.0mg/ml的苯甲醇标准储备溶液。该储备液应在0℃～4℃冰箱冷藏保存。
3.4 系列浓度苯甲醇标准溶液：分别精密量取一定体积的苯甲醇标准储备溶液（3.3）于10ml量瓶中，以无水乙醇（3.1）稀释并定容至刻度，得系列浓度为0.05mg/ml 、0.10mg/ml、0.20mg/ ml、0.30g/ml、0.40mg/ml、0.50mg/ml的标准溶液。
4 仪器和设备
4.1 气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器（fid）、质谱检测器（msd）。
4.2 分析天平：感量为0.0001g。
4.3 分析天平：感量为0.01g。
4.4 容量瓶：10ml、100ml。
4.5 具塞刻度离心试管：10ml。
4.6 涡旋振荡器。
4.7 恒温水浴锅。
4.8 超声波清洗仪。
4.9 离心机：转速不小于5000r/min。
4.10 注射式样品过滤器（有机溶媒型，0.45μm）。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取0.5g～1.0g（精确至0.01g）样品于10ml容量瓶中，加入5ml无水乙醇（3.1），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，置于50℃水浴中加热5min（液体类样品不需水浴加热），超声提取20min，冷却至室温后，用无水乙醇（3.1）稀释至刻度，混匀后转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
若样品中苯甲醇的质量浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2 色谱条件
5.2.1 气相色谱（gc/fid）参考条件
a） 色谱柱：hp-ffap石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm，硝基对苯二酸改性的聚乙二醇），或相当者；
b）柱温程序：初始温度150℃，以10℃/min的速率升温至180℃，保持3min后，再以20℃/min的速率升温至230℃，保持5min；
c）进样口温度：240℃；
d） 检测器温度：250℃；
e）载气：n2，流速：1.0ml/min；
f）氢气流量：40ml/min；
g） 空气流量：400ml/min；
h） 尾吹气氮气流量：30ml/min；
i） 进样方式：分流进样，分流比：40：1；
j） 进样量：1µl。
注：载气、空气、氢气流速随仪器而异，操作者可根据仪器及色谱柱等差异，通过试验选择最佳操作条件，使苯甲醇与化妆品中其他组分峰获得完全分离。
5.2.2 气相色谱-质谱（gc/ms））参考条件
a）色谱柱：hp-ffap石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm，硝基对苯二酸改性的聚乙二醇）或相当者；
b）柱温程序：程序升温：初始温度150℃，以10℃/min的速率升温至180℃，保持3min后，再以20℃/min的速率升温至230℃，保持5min；
c） 进样口温度：230℃；
d） 接口温度：240℃；
e） 载气：氦气1.0 ml/min；
f）电离方式：ei；
g）电离能量：70ev；
h） 监测方式：全扫描；
i）监视离子范围（m/z）：20～110；
j）进样方式：分流进样，分流比：40：1
k）进样量：1.0µl。
5.3 测定
按“5.2.1”项下色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.4）分别进样，进行气相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下样品待测溶液进样1μl，将测定成分的峰面积，代入回归方程计算苯甲醇的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中苯甲醇的含量。
苯甲醇标准溶液气相色谱图参见附录a的图a.1。
5.4 确证
必要时，采用气相色谱-质谱确证阳性结果，以检查化妆品中是否有其它物质干扰苯甲醇的测定。气相色谱-质谱条件参见（5.2.2），如果检出的色谱峰的保留时间与标准物质的保留时间一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且所选择的离子的相对丰度比与标准物质的相对丰度比一致，则可判断样品中存在苯甲醇。
苯甲醇的全扫描图参见附录c的图c.1；
苯甲醇的质谱图参见附录c的图c.2。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.05%～0.5%范围内，测定结果的平均回收率在97.9%～108.7%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
高效液相色谱法
1 范围
本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中防腐剂苯甲醇（cas：100-51-6）含量的方法。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中苯甲醇含量的测定。
暂无实验数据表明本方法适用于蜡质类化妆品中苯甲醇含量的测定。
2 方法提要
样品在经过提取后，采用高效液色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对苯甲醇的检出限为0.000005μg，定量下限为0.00002μg。若取1.0g样品，本方法对苯甲醇的检出浓度为0.0000005%；最低定量浓度为0.000002%。
3 试剂和材料
水为超纯水。
3.1 甲醇：色谱纯。
3.2 苯甲醇，纯度≥99.5%。
3.3 苯甲醇标准储备液［ （苯甲醇）=1.0g/l］：精密称取苯甲醇标准品0.1000g于100ml的容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度。即得质量浓度为1.0mg/ml的苯甲醇标准储备溶液。该储备液应在0℃～4℃冰箱冷藏保存。
3.4 系列浓度苯甲醇标准溶液：分别精密量取一定体积的苯甲醇标准储备溶液（3.3）于10ml量瓶中，以甲醇（3.1）稀释并定容至刻度，得系列浓度为0.05mg/ml 、0.10mg/ml、0.20mg/ ml、0.30g/ml、0.40mg/ml、0.50mg/ml的标准溶液。
4 仪器和设备
4.1 液相色谱仪：具紫外检测器。
4.2 分析天平：感量为0.0001g。
4.3 分析天平：感量为0.01g。
4.4 容量瓶：10ml、100ml。
4.5 具塞刻度离心试管：10ml。
4.6 涡旋振荡器。
4.7 超声波清洗仪。
4.8 离心机：转速不小于5000r/min。
4.9 恒温水浴锅。
4.10 注射式样品过滤器（有机溶媒型，0.45μm）。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取0.5g～1.0g（精确至0.01g）样品于10ml容量瓶中，加入5ml甲醇（3.1），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，置于50℃水浴中加热5min（液体类样品不需水浴加热），超声提取20min，冷却至室温后，用甲醇（3.1）稀释至刻度，混匀后转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
若样品中苯甲醇的质量浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2 色谱条件
a）色谱柱：c18柱（250mm ×4.6mm，5μm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂）；
b）流动相：甲醇-水，梯度洗脱参考条件见下表：
|
时间（min） |
甲醇（%） |
水（%） |
|
0 |
35 |
65 |
|
12 |
35 |
65 |
|
15 |
70 |
30 |
|
20 |
100 |
0 |
|
35 |
100 |
0 |
|
40 |
35 |
65 |
|
45 |
35 |
65 |
注：梯度洗脱条件，操作者可根据样品的不同选择最佳条件，使苯甲醇与化妆品中其他组分峰获得完全分离。
c） 流速：1.0ml/min；
d） 检测波长：210nm；
e） 柱温： 35℃；
f） 进样量：10μl。
5.3 测定
按“5.2”项下色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.4）分别进样，进行液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下样品待测溶液进样10μl，将测定成分的峰面积，代入回归方程计算苯甲醇的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中苯甲醇的含量。
苯甲醇标准溶液高效液相色谱图参见附录b的图b.1。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.05%～0.5%范围内，测定结果的平均回收率在91.9%～102.7%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
附录a （资料性附录）气相色谱图示例（略）
图a.1 苯甲醇标准溶液的气相色谱图（略）
附录b （资料性附录）高效液相色谱图示例（略）
图b.1 苯甲醇标准溶液的高效液相色谱图（略）
附录c （资料性附录）gc/ms示例（略）
图c.1 苯甲醇标准溶液的gc/ms全扫描色谱图（略）
图c.2 苯甲醇标准溶液的gc/ms质谱图（略）
表c.1 苯甲醇特征离子表
|
名称 |
分子式 |
cas编号 |
特征选择离子及丰度比 |
|
苯甲醇 |
c7h8o |
100-51-6 |
79（100），108（89），91（18）， |
附件11：
化妆品中苯甲酸及其盐的检测方法
高效液相色谱法
1 范围
本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中防腐剂苯甲酸（cas：65-85-0）及其钠盐（以苯甲酸计）含量的方法。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中苯甲酸及其钠盐的测定。
暂无实验数据表明本方法适用于蜡质类化妆品中苯甲酸及其钠盐含量的测定。
2 方法提要
试样经酸化后，用乙醇和水的混合溶液，经水浴、超声提取，采用高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法的检出限为0.000225μg，定量下限为0.00075μg。若取1.0g样品，本方法对苯甲酸的检出浓度为0.0001%；最低定量浓度为0.0004%。
必要时，采用气相色谱-质谱（gc/ms）确证。
3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。
3.1 无水乙醇。
3.2 磷酸二氢钠。
3.3 磷酸。
3.4 硫酸。
3.5 硫酸〔c（1/2h2so4） =2 mol/l〕：取 6ml硫酸（3.4）缓缓注入100ml水中，冷却摇匀。
3.6 乙醇-水混合液：取90ml无水乙醇和10ml水混合摇匀。
3.7 磷酸二氢钠缓冲溶液（0.02mol/l，ph=2.2）： 称取3.12g磷酸二氢钠，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调ph值至2.2。
3.8 甲醇，色谱纯。
3.9 苯甲酸，纯度≥99.5%。
3.10 苯甲酸标准储备液［ （苯甲酸）=1.0g/l］：精密称取苯甲酸0.1000g于100ml容量瓶中，用乙醇-水混合液（3.6）溶解并稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/ml的苯甲酸标准储备溶液。该储备液应在0℃～4℃冰箱冷藏保存。
3.11 系列浓度苯甲酸标准溶液：分别精密量取一定体积的苯甲酸标准储备溶液（3.10）于10ml量瓶中，以乙醇-水混合液（3.6）稀释并定容至刻度，得系列浓度为0.05mg/ml 、0.10mg/ml、0.20mg/ ml、0.30g/ml、0.40mg/ml、0.50mg/ml的标准溶液。
4 仪器和设备
4.1 液相色谱仪：具紫外检测器。
4.2 气相色谱-质谱仪。
4.3 分析天平：感量为0.0001g。
4.4 分析天平：感量为0.01g。
4.5 涡旋振荡器。
4.6 恒温水浴锅。
4.7 超声波清洗仪
4.8 离心机：转速不小于5000r/min。
4.9 酸度计。
4.10 容量瓶：10ml、50 ml、100ml
4.11 具塞刻度离心试管：10ml。
4.12 注射式样品过滤器（有机溶媒型，0.45μm）。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取0.5g～1.0g（精确至0.01g）样品于50ml容量瓶中，加入1ml硫酸〔c（1/2h2so4） =2 mol/l〕（3.5），30ml乙醇-水混合液（3.6），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，置于50℃水浴中加热5min，超声提取20min。冷却至室温后，用乙醇-水混合液稀释至刻度，在冰浴中放置1h，取出至室温后转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
若样品中苯甲酸的质量浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2色谱条件
a）色谱柱：c18柱（250mm ×4.6mm，5μm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂）；
b）流动相：甲醇-磷酸二氢钠缓冲液（0.02mol/l ，磷酸调ph为2.2）（3.7），梯度洗脱参考条件见下表：
|
时间（min） |
甲醇（%） |
磷酸二氢钠缓冲溶液（%） |
|
0 |
50 |
50 |
|
10 |
50 |
50 |
|
11 |
90 |
10 |
|
40 |
90 |
10 |
|
41 |
50 |
50 |
|
50 |
50 |
50 |
注：梯度洗脱条件，操作者可根据实际样品的不同选择最佳条件，使苯甲酸与化妆品中其他组分峰获得完全分离。
c）流速：1.0ml/min；
d）检测波长：230nm；
e）柱温：35℃；
f）进样量：10μl。
5.3 测定
按“5.2”项下色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.11）分别进样，进行液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下样品待测溶液进样10μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算苯甲酸的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中苯甲酸及其钠盐（以苯甲酸计）的含量。
苯甲酸标准溶液高效液相色谱图参见附录a的图a.1。
5.4 确证
必要时，采用气相色谱-质谱确证阳性结果，以检查化妆品中是否有其它物质干扰苯甲酸的测定。如果检出的色谱峰的保留时间与标准物质的保留时间一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且所选择的离子的相对丰度比与标准物质的相对丰度比一致，则可判断样品中存在苯甲酸或苯甲酸钠。
气相色谱-质谱参考条件
a）色谱柱：hp-ffap石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm，硝基对苯二酸改性的聚乙二醇）或相当者；
b）柱温程序：初始温度150℃，以10℃/min的速率升温至180℃，保持3min后，再以20℃/min的速率升温至230℃，保持5min；
c）进样口温度：230ºc；
d）接口温度：240 ºc；
e）载气：氦气1.0 ml/min；
f）电离方式：ei；
g）电离能量：70ev；
h）监测方式：全扫描；
i）监视离子范围（m/z）：20～130；
j）进样方式：分流进样，分流比：40：1
k）进样量：1.0µl。
苯甲酸的全扫描图参见附录c的图c.1；
苯甲酸的质谱图参见附录c的图c.2。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.05%～0.5%范围内，测定结果的平均回收率在92.5%～104.9%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
气相色谱法
1 范围
本方法规定了用气相色谱法测定化妆品中防腐剂苯甲酸（cas：65-85-0）及其钠盐的含量。
本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中苯甲酸及其钠盐含量的测定。
暂无实验数据表明本方法适用于蜡质类化妆品中苯甲酸及其钠盐（以苯甲酸计）含量的测定。
2 方法提要
试样经酸化后，用乙醚低温超声提取，提取溶液除去乙醚，残渣用无水乙醇溶解定容，离心，取上清液经滤膜过滤，采用气相色谱仪分离，氢火焰离子化检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法的检出限为0.0025μg，定量下限为0.0083μg。若取1.0g样品，本方法对苯甲酸的检出浓度为0.0025%，最低定量浓度为0.0083%。
3 试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯。水为超纯水。
3.1 无水乙醇。
3.2 乙醚。
3.3 盐酸。
3.4 盐酸-水混合液：取50ml盐酸（3.3）和50ml水混合摇匀。
3.5 苯甲酸，纯度≥99.5%。
3.6 苯甲酸标准储备液［ （苯甲酸）=1.0g/l］：精密称取苯甲酸标准品0.1000g于100ml的容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/ml的苯甲酸标准储备溶液。该储备液应在0℃～4℃冰箱冷藏保存。
3.7 系列浓度苯甲酸标准溶液：分别精密量取一定体积的苯甲酸标准储备溶液（3.6）于10ml量瓶中，以无水乙醇（3.1）稀释并定容至刻度，得系列浓度为0.05mg/ml 、0.10mg/ml、0.20mg/ ml、0.30g/ml、0.40mg/ml、0.50mg/ml的标准溶液。
4 仪器和设备
4.1 气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器（fid）。
4.2 分析天平：感量为0.0001g。
4.3 分析天平：感量为0.01g。
4.4 涡旋振荡器。
4.5 超声波清洗仪。
4.6 恒温水浴锅。
4.7 离心机：转速不小于5000r/min。
4.8 容量瓶：5ml、100ml。
4.9 具塞试管：50ml。
4.10 具塞刻度离心试管：10ml。
4.11 蒸发皿：50 ml。
4.12 注射式样品过滤器（有机溶媒型，0.45μm）。
5 测定步骤
5.1 样品处理
液体类化妆品：称取0.5g～1.0g（精确至0.01g）试样于50ml具塞试管中，加0.5ml盐酸-水混合液（3.4）和20.0ml乙醚（3.2），盖上塞子，称重，涡旋振摇使试样与提取溶剂充分混匀，冰浴超声提取20min，用乙醚（3.2）补足重量，混匀后静置至溶液分层，准确移取上清液10.0ml于50ml蒸发皿中，40℃水浴蒸至近干，残渣用无水乙醇（3.1）转移至5ml容量瓶定容，混匀，再转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min，上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
膏霜、乳、粉类化妆品：称取0.5g～1.0g（精确至0.01g）试样于50ml具塞试管中，加1ml纯水振摇后加入0.5ml盐酸-水混合液（3.4）及20.0ml乙醚（3.2），盖上塞子，称重，涡旋振摇使试样与提取溶剂充分混匀，冰浴超声提取20min，用乙醚（3.2）补足重量，混匀后静置至溶液分层，准确移取上清液10.0ml于50ml蒸发皿中，40℃水浴蒸至近干，残渣用无水乙醇转（3.1）移至5ml容量瓶定容，混匀，再转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min，上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。
若样品中苯甲酸的质量浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。
5.2 色谱条件
a）色谱柱：hp-ffap石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm，硝基对苯二酸改性的聚乙二醇），或相当者；
b）柱温程序：初始温度150℃，以10℃/min的速率升温至180℃，保持3min后，再以20℃/min的速率升温至230℃，保持5min；
c）进样口温度：240℃；
d）检测器温度：250℃；
e）载气：n2，流速：1.0ml/min；
f）氢气流量：40 ml/min；
g）空气流量：400 ml/min；
h）尾吹气氮气流量：30 ml/min；
i）进样方式：分流进样，分流比：40：1；
j）进样量：1µl。
注：载气、空气、氢气流速随仪器而异，操作者可根据仪器及色谱柱等差异，通过试验选择最佳操作条件，使苯甲酸与化妆品中其他组分峰获得完全分离。
5.3 测定
按“5.2”项下的色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.7）分别进样，进行气相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1”项下样品待测溶液进样1μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算苯甲酸的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中苯甲酸及其钠盐（以苯甲酸计）的含量。必要时用第一法佐证。
苯甲酸标准溶液气相色谱图参见附录b的图b.1。
6 计算（略）
7 回收率
当样品添加标准溶液浓度在0.05%～0.5%范围内，测定结果的平均回收率在90.3%～107.7%。
8 允许差
在重复条件下获得的同一样品溶液两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
附录a （资料性附录）高效液相色谱图示例（略）
图a.1 苯甲酸标准溶液的高效液相色谱图（略）
附录b（资料性附录） 气相色谱图示例（略）
图b.1 苯甲酸标准溶液气相色谱图（略）
附录c（资料性附录） gc/ms示例（略）
图c.1 苯甲酸标准溶液的全扫描图（略）
图c.2 苯甲酸标准溶液的质谱图（略）
表1 苯甲酸特征离子表
|
名称 |
分子式 |
cas编号 |
特征选择离子及丰度比 |
|
苯甲酸 |
c7h6o2 |
65-85-0 |
105（100），122（83）， 77（66） |
相关法律法规
